Скрининг на мутантов с фенотипическими дефектов простой метод для выявления генов, которые функционируют в данный биологический процесс. В этой статье мы опишем, как культура свободного червей жизни (например, Pristionchus расШсиз) В лабораторных и показывают два различных метода мутагенеза, EMS и TMP / UV.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Введение в Worm Лабораторная работа: от культивирования червей для мутагенеза
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот протокол описывает процедуры для поддержания нематод в лаборатории и, как mutagenize их с помощью двух альтернативных способов: этиловый сульфонат метана (EMS) и 4, 5, 8-trimethylpsoralen в сочетании с ультрафиолетовым светом (TMP / UV). Нематоды являются мощными биологическими системами для ДНК-исследований из-за их простой план тела и система скрещивания, в состав которого входят самооплодотворяющимися гермафродиты и мужчин, которые могут генерировать сотни потомства на одно животное. Нематоды ведутся в агара чашки, содержащие газон бактерий и могут быть легко перенесены из одной пластины к другой, используя выбор. EMS является алкилирующего агента обычно используется, чтобы вызвать точечные мутации и малых удалений, в то время как TMP / UV основном вызывает удалений. В зависимости от вида нематод используются, концентрации EMS и TMP должны быть оптимизированы. Чтобы изолировать рецессивных мутаций расШсиз нематоды Pristionchus, животные F2 поколения были визуально обследование на фенотипы. Для иллюстрации этих методов мы мутагенизированных червей и искали Несогласованные (UNC), унылый (DPY) и трансформатор (TRA) мутантов.
Протокол
Часть 1: Подготовка нематоды питательной среды (НГО) чашки Петри
Экспериментальные нематод, таких как С. Элеганс и П. расШсиз, как правило, культивируют в лаборатории на 6 см чашках Петри содержащие нематода Рост средний (НГО) 1. Черви хранятся при температуре 20 ° C, но может быть инкубировали при диапазоне температур (от 4 ° C - 25 ° С), в зависимости от видов нематод и экспериментального проектирования. Для подготовки пластин с НГО, стандартные стерильные методы должны быть использованы, чтобы предотвратить грибковые и бактериальные загрязнения. Ниже приводится протокол для подготовки NGM плит:
- В....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Мутагенеза является широко применяется методика генетических исследований в различных экспериментальных модельных организмов. Мутагенез эксперименты часто используется для определения функций генов 2. Мутагенеза процедур, описанных здесь, может использоваться не только для P. расШсиз, но и для С. Элеганс и других связанных с ними видов нематод. Здесь мы опишем два метода, EMS и TMP / УФ-мутагенеза.
EMS является химическое вещество, которое вызывает точечные мутац.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была осуществлена за счет гранта NSF IOB # 0615996.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Ссылки
- Brenner, S. Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. Gene....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
