振動プローブによる生体電気の電流の測定
Summary
様々な生物学的システムにおける生体電流を測定する非侵襲的な振動プローブの製造、キャリブレーションおよび使用が記載されている。
Abstract
イオンの能動輸送によって生成された電場は、、多くの生物系に存在し、多くの場合、組織や臓器の重要な役割を果たします。例えば、彼らは、創傷治癒中に細胞遊走を誘導する上で重要な役割を果たします。ここでは、細胞外の電流を測定するための超高感度振動プローブの製造と使用について説明します。プローブは、生理食塩水でμA/ cm 2の範囲でイオン電流を検出できる小型の白金黒の先端（30〜35ミクロン）、との絶縁、尖った金属線です。プローブは、圧電ベンダーによって約200 Hzで振動する。イオン電流の存在下では、プローブはその運動の両極端の間の電圧差を検出する。ロックイン振動のプローブの周波数にロックすることで外部ノイズ増幅器出力フィルタ。データはコンピューターに記録されます。プローブは、正確に1.5μA/ cm 2の電流を適用するチャンバーを使用して、適切な生理食塩水での実験の開始時と終了時に較正されています。我々は、プローブを作るシステムを設定し、キャリブレーションする方法について説明します。我々はまた、角膜の測定の手法を明らかにし、別の標本（角膜、皮膚、脳）からいくつかの代表的な結果を示す。
Protocol
1。プローブ製造ブランクプローブは、世界の精密機器（elgiloy /ステンレスパリレンコーティングされた微小電極）（以下"特定の試薬と機器の表"を参照）から購入しています。プローブは、良好な接続を確保するためにメス（＃11ブレード）で掻き切り取った部分は先端の後ろに25〜30ミリメートルとパリレン絶縁体の約5mmをカットしている。プローブは、導電性銀…
Discussion
我々は低コスト、基本的な、しかし生物系の様々な非侵襲的に電流を測定するための高感度な振動プローブシステムを説明します。
可能な限り修正
- プラチナ/イリジウム電極（世界の精密機器、猫＃PTM23B20が）場合、ステンレス鋼の代わりに使用されている、その後、金めっきの段階を排除することができます。
アプリケーション
<p class="j…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は教授のリチャードBorgens、振動プローブシステムを組み立てるに助け麻痺の研究、パデュー大学、センターに感謝しています。この研究は、MZとBRに、そして一部の再生医療研究所カリフォルニアRB1 – 01417、NSF MCB – 0951199、からの補助金によって、失明を防ぐための研究からUnrestrictedグラント、カリフォルニア大学デービス校の眼科でNEIの助成金NIH 1R01EY019101によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eligoy-Stainless Electrode | World Precision Instruments | SSM33A70 | 76 mm, 7 MΩ, 1-2μm tip | |
| Gold R30 connector | www.vectorelect.com | R30 | Re-usable | |
| Silver-loaded epoxy | 3M | SL65 | Mix 1-part Resin with 1-part Hardener | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ40 | Magnification x6 to x40 | |
| Potassium dicyanoaurate (KAu(CN)2) | Sigma-Aldrich | 379867 | CAUTION: Toxic | |
| Chloroplatinic acid hydrate (H2PtCl6 x 6H2O) | Sigma-Aldrich | 520896 | CAUTION: Toxic | |
| Lead(II) acetate trihydrate (Pb(CH3CO2)2 x 3H2O) | Sigma-Aldrich | 185191 | CAUTION: Toxic | |
| Nano-Amp power source | Made in-house | – | Powered by six 1.5 V (AAA) batteries | |
| 3-dimensional micro-positioner | Line Tool Co. | Model H | ||
| Lock-in amplifier | Stanford Research Systems | SR530 | ||
| Digital I/O interface | National instruments | PCI-6220 | ||
| Shielded Connector Block with BNC connections | National instruments | BNC-2110 | ||
| Strathclyde Electrophysiology Software | University of Strathclyde Institute of Pharmacy and Biomedical Sciences, UK | WinWCP V4.1.5 | Free download from: http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/software_ses.htm | |
| Calibration Chamber | Made in-house | |||
| Constant Current Calibrator | Vibrating Probe Company | Powered by one 9 V (PP3) battery |
References
- Reid, B., Nuccitelli, R., Zhao, M. Non-invasive measurement of bioelectric currents with a vibrating probe. Nat. Protoc. 2, 661-9282 (2007).
- Reid, B., Song, B., McCaig, C. D., Zhao, M. Wound healing in rat cornea: the role of electric currents. FASEB J. 19, 379-386 (2005).
- Lois, N., Reid, B., Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Electric currents and lens regeneration in the rat. Exp. Eye Res. 90, 316-323 (2010).
- Wang, E., Reid, B., Lois, N., Forrester, J. V., McCaig, C. D., Zhao, M. Electrical inhibition of lens epithelial cell proliferation: an additional factor in secondary cataract. FASEB J. 19, 842-844 (2005).
- Guo, A., Song, B., Reid, B., Gu, Y., Forrester, J. V., Jahoda, C., Zhao, M. Effects of physiological electric fields on migration of human dermal fibroblasts. J. Invest. Derm. , (2010).
- Reid, B., Song, B., Zhao, M. Electric currents in Xenopus tadpole tail regeneration. Dev. Biol. 335, 198-207 (2009).
- Zhao, M., Song, B., Pu, J., Wada, T., Reid, B. Electrical signals control wound healing through phosphatidylinositol-3-OH kinase-γ. 442, 457-460 (2006).
- Reid, B., EO, G. r. a. u. e. -. H. e. r. n. a. n. d. e. z., Mannis, M. J., Zhao, M. Modulating endogenous electric currents in human corneal wounds – a novel approach of bioelectric stimulation without electrodes. Cornea. , (2010).
- Nuccitelli, R. An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents. J. Cell Biol. 63, 614-628 (1974).
- Hotary, K. B., Nuccitelli, R., Robinson, K. R. A computerized 2-dimensional vibrating probe for mapping extracellular current patterns. J. Neurosci. Meth. 43, 55-67 (1992).
- Nuccitelli, R. Endogenous ion currents and DC electric fields in multicellular animal tissues. Bioelectromagnetics Supplement. 1, 147-157 (1992).
- Levin, M. Bioelectric mechanisms in regeneration: Unique aspects and future perspectives. Seminars in Cell Dev. Biol. 20, 543-556 (2009).
- Zhao, M. Electric fields in wound healing – An overriding signal that directs cell migration. Seminars in Cell Dev. Biol. 20, 674-682 (2009).
Tags
Bioelectric CurrentVibrating ProbeActive Transport Of IonsBiological SystemsCell MigrationWound HealingUltrasensitive Vibrating ProbesExtracellular Electric CurrentsInsulated Metal WirePlatinum-black TipPhysiological SalinePiezoelectric BenderIonic CurrentsVoltage DifferenceLock-in AmplifierComputer RecordingCalibrationCornea MeasurementSkin MeasurementBrain Measurement
Cite This Article
Reid, B., Zhao, M. Measurement of Bioelectric Current with a Vibrating Probe. J. Vis. Exp. (47), e2358, doi:10.3791/2358 (2011).