Misura della corrente bioelettrica con una sonda vibrante
Summary
L', taratura fabbricazione e l'uso di sonde a vibrazione non invasivo per misurare la corrente bioelettrica in vari sistemi biologici è descritto.
Abstract
Campi elettrici, generati dal trasporto attivo di ioni, sono presenti in molti sistemi biologici e spesso svolgono funzioni importanti in tessuti e organi. Ad esempio, essi svolgono un ruolo importante nel dirigere la migrazione delle cellule durante la guarigione delle ferite. Qui si descrive la fabbricazione e l'uso di sonde a vibrazione ultrasensibile per la misura extracellulare correnti elettriche. Il sensore è un isolato, filo metallico affilato con una piccola punta di platino-nero (30-35 micron), in grado di rilevare le correnti ioniche nei ìA / cm 2 gamma di soluzione fisiologica. La sonda viene fatta vibrare a circa 200 Hz da un piezoelettrico bender. In presenza di una corrente ionica, la sonda rileva una differenza di tensione tra gli estremi del suo movimento. Un lock-in filtri amplificatore i rumori estranei, bloccando alla frequenza della sonda di vibrazione. I dati vengono registrati su computer. La sonda è calibrata all'inizio e alla fine degli esperimenti in soluzione fisiologica del caso, con una camera che si applica una corrente di esattamente 1,5 ìA / cm 2. Noi descriviamo come fare le sonde, impostare il sistema e calibrare. Abbiamo anche dimostrare la tecnica di misurazione della cornea, e mostrano alcuni risultati rappresentante di diversi esemplari (cornea, cute, cervello).
Protocol
Discussion
Descriviamo un basso costo, di base, ma molto sensibile sistema sonda vibrante per la misurazione non invasiva corrente elettrica in una varietà di sistemi biologici.
Le modifiche possibili
- Se platino / iridio elettrodi (Strumenti di precisione mondiale; cat # PTM23B20) sono utilizzati al posto di acciaio inox, poi la fase di placcatura in oro può essere eliminato.
Applicazioni
Abbiamo usato la sonda vibrante per misura…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Siamo grati al professor Richard Borgens, Centro per la Ricerca Paralisi, Purdue University, per un aiuto per il montaggio della sonda sistema vibrante. Questo studio è stato sostenuto da NIH 1R01EY019101 NEI concedere a MZ e BR, e in parte da finanziamenti del California Institute of Regenerative Medicine RB1-01417, NSF MCB-0951199, e da una sovvenzione illimitata di ricerca per prevenire la cecità, UC Davis Oftalmologia.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eligoy-Stainless Electrode | World Precision Instruments | SSM33A70 | 76 mm, 7 MΩ, 1-2μm tip | |
| Gold R30 connector | www.vectorelect.com | R30 | Re-usable | |
| Silver-loaded epoxy | 3M | SL65 | Mix 1-part Resin with 1-part Hardener | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ40 | Magnification x6 to x40 | |
| Potassium dicyanoaurate (KAu(CN)2) | Sigma-Aldrich | 379867 | CAUTION: Toxic | |
| Chloroplatinic acid hydrate (H2PtCl6 x 6H2O) | Sigma-Aldrich | 520896 | CAUTION: Toxic | |
| Lead(II) acetate trihydrate (Pb(CH3CO2)2 x 3H2O) | Sigma-Aldrich | 185191 | CAUTION: Toxic | |
| Nano-Amp power source | Made in-house | – | Powered by six 1.5 V (AAA) batteries | |
| 3-dimensional micro-positioner | Line Tool Co. | Model H | ||
| Lock-in amplifier | Stanford Research Systems | SR530 | ||
| Digital I/O interface | National instruments | PCI-6220 | ||
| Shielded Connector Block with BNC connections | National instruments | BNC-2110 | ||
| Strathclyde Electrophysiology Software | University of Strathclyde Institute of Pharmacy and Biomedical Sciences, UK | WinWCP V4.1.5 | Free download from: http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/software_ses.htm | |
| Calibration Chamber | Made in-house | |||
| Constant Current Calibrator | Vibrating Probe Company | Powered by one 9 V (PP3) battery |
References
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