In utero Intraventrikulär direktinsprutning och elektroporation av E16 Rat embryon

Abstract

In utero in vivo injektion och elektroporation av embryonala råtta hjärnbarken ger ett kraftfullt verktyg för manipulering av enskilda stamceller kantar väggarna i den laterala ventrikeln. Denna teknik är nu allmänt används för att studera processer som corticogenesis av över-uttrycka sig eller knackar ner gener och observera effekter på cellulär proliferation, migration och differentiering. I jämförelse med traditionella knockout strategier, ger in utero elektroporering ett snabbt sätt att manipulera en befolkning av celler under en viss tidsmässig fönster. I den här videon protokoll, disposition vi experimentell metodik för att förbereda råttor för operation, utsätta livmodern hornen genom laporatomy, injicera DNA i de laterala ventriklarna av det utvecklande embryot, electroporating DNA i stamceller som kantar laterala väggen, och ta hand om djur efter kirurgi. Vårt laboratorium använder detta protokoll för operationer på E15-E21 råttor, men det är oftast utförs på E16 som visas i denna video.