Выделение и расширение взрослой мыши нервные стволовые клетки Использование Neurosphere Пробирной

Summary

Это видео демонстрирует протокол neurosphere метод анализа для создания и расширения нервные стволовые клетки из взрослых региона перивентрикулярной мыши, и предоставляет технические идеи для обеспечения можно добиться воспроизводимых культур neurosphere.

Abstract

Выделение и расширение предполагаемого нервные стволовые клетки (NSCs) от взрослых мышиных мозга была впервые описана Рейнольдса и Вайс в 1992 году использовании определенного химического бессывороточной культуре системы, известной как neurosphere анализа (NSA). В данном анализе большинства дифференцированных типов клеток умирают в течение нескольких дней культуры, но небольшая популяция реагирует фактор роста клеток-предшественников подвергаются активной пролиферации в присутствии эпидермального фактора роста (ЭФР) и / основной фактор роста фибробластов (bFGF). Эти клетки образуют колонии недифференцированных клеток, называемых нейросферы, который, в свою очередь, может быть субкультивировали расширить пул нервные стволовые клетки. Более того, клетки могут вызвать их дифференцировку, создавая трех основных типов клеток центральной нервной системы, т.е. нейроны, астроциты и олигодендроциты. Этот препарат обеспечивает бесценным инструментом для питания последовательными, возобновляемый источник недифференцированных предшественников ЦНС, которые могут быть использованы для экстракорпорального исследований, а также в лечебных целях.

Это видео демонстрирует метод АНБ для создания и расширения NSCs от взрослого регионе перивентрикулярной мыши, и предоставляет технические идеи для обеспечения можно добиться воспроизводимых культур neurosphere. Процедура включает в себя уборка мозг от взрослой мыши, микро-рассечение перивентрикулярной области, подготовки ткани и культуры в АНБ. Собрано ткани первой химически переваривается использованием трипсина-EDTA и затем механически диссоциированных в среде НСК для достижения суспензии отдельных клеток и, наконец, помещают в АНБ. Через 7-10 дней в культуре, в результате первичного нейросферы готовы к субкультуре достичь количества клеток, необходимых для будущих экспериментов.

Protocol

Часть 1: Основные создан прежде чем приступить к вскрытию:

1. Соответствующий объем полной среды НСК получают путем смешивания NeuroCult НСК базальной среды и NeuroCult НСК распространения дополнений в 9:01 отношения, соответственно. НСК среда может также быть сделаны в лаборатории на основе КНБ роста состава среды в литературе ¹. Если ваша лаборатория не имеет большого опыта работы с созданием среды, мы настоятельно рекомендуем использовать коммерчески доступные среды, которая была под контролем качества для NSCs роста до того, как продается (как это имеет место для NeuroCult, Technolgies стволовых клеток).
2. Средний разогревается в 37 ° С в....

Discussion

Neurosphere анализа ² получила широкое внимание в научное сообщество не только для выделения и изучения NSCs из ЦНС ^4-5, но и для выделения других типов предполагаемых стволовых клеток из различных тканей, таких как рак молочной железы ⁶ и ⁷ и сердце для идентификации мозга, молочной железы и толстой кишки опухолью стволовые клетки ^8-9 предполагая, что эта культура система может быть применена к ряду соматических и опухолевых предшественников клеточных популяций по .......

Materials