चूहे में मॉडलिंग स्ट्रोक - रेशा मॉडल के साथ मध्य प्रमस्तिष्क धमनी आड़
Summary
मध्य मस्तिष्क धमनी की filamentous रोड़ा चूहों में ischemic स्ट्रोक के अध्ययन के लिए एक आम मॉडल है.
Abstract
Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.
Protocol
Discussion
क्षणिक, प्रॉक्सिमल एमसीए 18,19 रोड़ा मॉडल यहाँ प्रस्तुत रोगियों में ischemic स्ट्रोक का सबसे आम प्रकार के एक mimics 20 चर reperfusion के समय के आधार पर, मॉडल क्षणिक ischemic हमले (TIA) से बड़े से लेकर क्षति के विभिन्न ग्रेड प्रदान करता है. ischemic गोलार्द्ध के प्रमुख भागों सहित दौरे. इस झटके के बाद शोधकर्ता अलग pathophysiological तंत्र का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है 20,21.
सर्जरी एक कम समय अवधि में किया जा सकता है और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य घावों का उत्पादन. फिर भी, इस confounders की एक पूरी तरह से नियंत्रण की आवश्यकता आपरेशन तकनीक में 22 छोटे मतभेदों. रोधगलितांश पर अलग प्रभाव के लिए खाते सकता है. 23,24 इसके अलावा, मस्तिष्क संवहनी शरीर रचना विज्ञान में प्रसरण के कारण, विभिन्न माउस उपभेदों एक अलग परिणाम 25,26 शारीरिक दिखा. तापमान स्नायविक नुकसान को प्रभावित करता है, हाइपोथर्मिया छोटे 27 घावों और अतिताप अधिक गंभीर घाटे के लिए अग्रणी के साथ 28 तदनुसार, तापमान नियंत्रण और रखरखाव के इस मॉडल में अत्यधिक प्रासंगिक है.. इसके अलावा 29, ब्लड प्रेशर और रक्त गैसों परिणाम की महत्वपूर्ण confounders के हैं और की जरूरत निरीक्षण किया जा रहा है. त्वरित और न्यूनतम इनवेसिव तरीकों का उपयोग 30,31 (गैर इनवेसिव रक्तचाप माप, उपयुक्त और आसान पहुंच रक्त संग्रह साइटों) की सिफारिश की है. चतनाशून्य करनेवाली औषधि के चुनाव भी अत्यधिक महत्वपूर्ण है, के रूप में कुछ neuroprotective प्रभाव है, और हो सकता है / या vasodilators हो, Isoflurane उदाहरण के लिए के रूप में 32 नतीजतन, संज्ञाहरण के लिए जोखिम के रूप में संभव है और मानकीकृत रूप में कम किया जाना चाहिए. हम जानवरों को जो अब से 15 मिनट के लिए सर्जरी आया है बाहर.
शल्य साइट शेविंग microabrasions और सूजन पैदा करता है और बाल टुकड़े विज्ञप्ति. यह आगे सूजन को बढ़ाने के लिए और स्थानीय संक्रमण है, जो स्ट्रोक pathophysiology पर प्रभाव हो सकता है को बढ़ावा हो सकता है. आवास की स्थिति, विशेष रूप से संवर्धन के उपयोग, स्ट्रोक परिणाम को प्रभावित और मानकीकृत और शोध रिपोर्ट में वर्णित किया जाना चाहिए सकता है 6,33,34 पर्यावरण संवर्धन और reproducibility पर उसके प्रभाव का उपयोग चर्चा का विषय है. 35 एक अन्य महत्वपूर्ण confounder 36 ischaemia के अब समय के बाद विशेष रूप से स्ट्रोक संक्रमण के लिए प्रेरित किया जोखिम है, जो अतिरिक्त रुग्णता और वृद्धि की मृत्यु के लिए सुराग 37,38 के रूप में संक्रमण 5 करने के लिए 3 दिन के आसपास प्रतीक बन जाते हैं, यह इस तरह के मॉडल में लंबे अनुवर्ती अवधि के लिए महत्वपूर्ण परिणाम है.
परिणाम स्ट्रोक, मानकीकरण और गुणवत्ता नियंत्रण के लिए उपन्यास उपचार कार्यनीतियों के विकास के लिए प्रासंगिक उत्पादन preclinical translational स्ट्रोक अनुसंधान में अत्यधिक महत्वपूर्ण 39 "अच्छी प्रयोगशाला अभ्यास" 40,41 जनादेश है.
- प्रयुक्त जानवर की एक उपयुक्त और विस्तृत वर्णन;
- नमूना आकार की गणना और उम्मीद प्रभाव आकार पर रिपोर्टिंग;
- शामिल किए जाने और अपवर्जन मानदंड, इस अध्ययन से पहले स्थापित;
- समूहों में आवंटन के randomization;
- जांचकर्ताओं के लिए सम्मान के साथ आवंटन छिपाव;
- विश्लेषण से बाहर रखा पशुओं रिपोर्टिंग;
- परिणाम के अंधे मूल्यांकन;
- ब्याज और अध्ययन के वित्तपोषण के संभावित संघर्ष रिपोर्टिंग.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम यूरोपीय समुदाय अनुदान समझौता n ° 201024 और n ° 202,213 (यूरोपीय स्ट्रोक नेटवर्क) के तहत सातवें फ्रेमवर्क कार्यक्रम (FP7/2007-2013) द्वारा वित्त पोषित किया गया था. अतिरिक्त धन Bundesministerium फर Bildung und Forschung (स्ट्रोक अनुसंधान बर्लिन के लिए केंद्र), और ड्यूश Forschungsgemeinschaft (Exzellenzcluster NEUROCURE) के द्वारा दिया गया था.
लेखकों एनीमेशन के उत्पादन के लिए समर्थन के लिए Mareike Thielke (प्रायोगिक तंत्रिका विज्ञान के लिए Dep., Charité बर्लिन) संचालन और Elke लुडविग (Charité वीडियो सेवाएँ) के दौरान धन्यवाद करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical scissors (skin cut) | FST | 14028-10 | ||
| 2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | FST | 11253-20 | ||
| Spring scissors (according to Vannas) | FST | 15000-00 | ||
| Applying forceps for micro clamps | FST | 00072-14 | ||
| Micro vascular clamp (e.g. S&G B1-V) | FST | 00396-01 | Also Serrefine possible | |
| 2 Hemostats according to Hartmann | FST | 13002-10 | ||
| Needle holder (according Olsen-Hegar or other) | FST | 12002-14 | ||
| Standard anatomical forceps (for wound closure) | FST | 11000-12 | ||
| 5/0 sutures | Suprama | for vascular ligatures | ||
| 6/0 sutures | Suprama | for skin suture, 5/0 also possible | ||
| Lidocaine (e.g. Xylocain Gel 2%) | Astra Zeneca | or other local pain relief | ||
| Dissecting microscope (stereo microscope), magnification 6x to max. 40x | Leica Zeiss | MZ6 Stemi2000C | ||
| Cold light source | Leica | KL1500 | ||
| Temperature feedback controlled heating pad system | FST | 21052-00 | With mouse pad and small probe | |
| Anaethesia system for isoflurane | ||||
| Isoflurane | Abott | |||
| Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 | Heated cage | |
| 8.0 nylon filament | Suprama | TEL181005 | for coating | |
| Scalpel | For cutting filament in pieces | |||
| Ruler | To cut correct length of filament | |||
| Xantopren M Mucosa | Heraeus Kulzer | |||
| Activator Universal Plus | Heraeus Kulzer | Optosil – Xantopren | ||
| 2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | FST | 11253-20 | ||
| A soft underlay for storing and grasping the uncoated filaments | e.g. swabs, foam, … | |||
| Receptacle for new build filaments | e.g. petri dish, flexible foam,… |
References
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