DsRNA इंजेक्शन द्वारा हस्तक्षेप आरएनएआई में ड्रोसोफिला भ्रूण
Summary
शाही सेना के हस्तक्षेप में जीन समारोह का विश्लेषण बहुत प्रभावी सिद्ध किया गया है<em> ड्रोसोफिला</em> Tracheal विकास. एक विस्तृत जियांग प्रयोगशाला द्वारा इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल पछाड़ना जीन की अभिव्यक्ति के लिए उड़ान भरने भ्रूण में dsRNA इंजेक्षन सचित्र है. इस तकनीक स्क्रीनिंग में ऊतक और अंग के विकास के लिए आवश्यक जीन के लिए क्षमता है<em> ड्रोसोफिला</em>.
Abstract
आनुवंशिक स्क्रीनिंग एक जटिल जैविक प्रक्रिया 1 में अंतर्दृष्टि पाने के लिए सबसे शक्तिशाली तरीके उपलब्ध है. आनुवंशिक हेरफेर के लिए पिछले कुछ वर्षों में कई सुधार और उपकरण 2 ड्रोसोफिला में उपलब्ध हो गए हैं . जल्द ही frie और मेलो 3 द्वारा प्रारंभिक खोज की है कि डबल असहाय आरएनए Caenorhabditis एलिगेंस, शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) के लिए एक शक्तिशाली रिवर्स आनुवंशिक दृष्टिकोण प्रदान करने के लिए ड्रोसोफिला अंग विकास में जीन के कार्यों का विश्लेषण करने के लिए दिखाया गया था में व्यक्तिगत जीनों की गतिविधि पछाड़ना के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के बाद 4, 5.
फेफड़े, गुर्दे, जिगर, और नाड़ी तंत्र सहित कई अंगों, branched ट्यूबलर नेटवर्क से बना रहे हैं कि परिवहन महत्वपूर्ण तरल पदार्थ या गैसों 6, 7. ड्रोसोफिला tracheal गठन के विश्लेषण एक शानदार मॉडल प्रणाली के लिए अन्य ट्यूबलर 8 अंगों के morphogenesis अध्ययन प्रदान करता है. बर्कले ड्रोसोफिला जीनोम परियोजना जीनों के सैकड़ों है कि tracheal प्रणाली में व्यक्त कर रहे हैं पता चला है. ट्यूब गठन की आणविक और सेलुलर तंत्र का अध्ययन करने के लिए, चुनौती tracheal विकास में इन जीनों की भूमिका को समझने की है. यहाँ, हम ड्रोसोफिला भ्रूण में पछाड़ना व्यक्ति के जीन की अभिव्यक्ति के dsRNA इंजेक्शन की एक विस्तृत विधि का वर्णन किया . हम सफलतापूर्वक नीचे dsRNA इंजेक्शन द्वारा अंतर्जात dysfusion (dys) जीन अभिव्यक्ति खटखटाया. Dys bHLH – पीए tracheal संलयन कोशिकाओं में व्यक्त प्रोटीन है, और यह tracheal शाखा संलयन 9, 10 के लिए आवश्यक है. dys – आरएनएआई पूरी तरह से dys अभिव्यक्ति का सफाया और tracheal संलयन दोष में हुई. यह अपेक्षाकृत सरल विधि tissure और ड्रोसोफिला में अंग विकास के लिए requried जीनों की पहचान के लिए एक उपकरण प्रदान करता है.
Protocol
Discussion
यहाँ dsRNA इंजेक्शन विधि वर्तमान ड्रोसोफिला tracheal विकास में एक जीन समारोह की एक बहुत संवेदनशील है और तेजी से विश्लेषण सक्षम बनाता है. इस विधि संभावित अन्य ऊतक और अंग के विकास के लिए जीन समारोह का विश्लेष?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों के लिए dysfusion सीडीएनए, Dys एंटीबॉडी और w 1118 मक्खियों के लिए स्टीफन कर्मचारियों को धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
References
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
- Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell. 95, 1017-1026 (1998).
- Misquitta, L., Paterson, B. M. Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).
- Horowitz, A., Simons, M. Branching morphogenesis. Circ. Res. 103, 784-795 (2008).
- Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis. Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).
- Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).
- Jiang, L., Crews, S. T. Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion. Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).
- Jiang, L., Crews, S. T. The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein. Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).
