Un ensayo Cortar organotípicos de alta resolución de imágenes a intervalos de tiempo de la migración neuronal en el cerebro postnatal

Resumen

Este protocolo describe un ensayo de corte organotípicos optimizado para el cerebro postnatal y de alta resolución de imágenes a intervalos de tiempo de la migración de los neuroblastos en la corriente migratoria rostral.

Resumen

Neurogénesis en el cerebro postnatal depende del mantenimiento de los tres eventos biológicos: la proliferación de las células progenitoras, la migración de los neuroblastos, así como la diferenciación y la integración de nuevas neuronas en circuitos neuronales ya existentes. Para la neurogénesis postnatal en los bulbos olfatorios, estos eventos están separados en tres áreas anatómicamente diferentes: la proliferación en gran medida se produce en la zona subependimaria (ZEE) de los ventrículos laterales, la migración de los neuroblastos recorrer a través de la corriente migratoria rostral (RMS), y las nuevas neuronas se diferencian y integrar dentro de los bulbos olfatorios (OB). Los tres dominios de servir como plataformas ideales para estudiar los mecanismos celulares, moleculares y fisiológicos que regulan cada uno de los eventos biológicos claramente. Este artículo describe un ensayo de corte organotípicos optimizado para el tejido cerebral post-natal, en el que las condiciones extracelular imitan el ambiente in vivo para la migración de los neuroblastos. Se demuestra que nuestro ensayo permite el movimiento uniforme, orientado y rápida de los neuroblastos en el RMS. Este ensayo será muy adecuado para el estudio de la regulación de las células autónomas y no autónomas de la migración neuronal mediante el uso de trasplante cruzado enfoques de ratones en diferentes fondos genéticos.

Protocolo

I. Procedimientos

Las siguientes técnicas se debe realizar bajo condiciones estériles, en una campana de flujo laminar, utilizando herramientas de esterilización.

Preparación de platos con fondo de cristal para rebanadas organotípicos

1. Los platos deben estar preparados en un ambiente estéril y el uso de herramientas esterilizadas.
2. Una caída de 150μL de medio de corte (ver recetas) se coloca en el centro de la parte de fondo de cristal de la placa con cuidado para evitar burbujas de aire en el medio.
3. Con una jeringa desechable equipada con un 23 aguja, múltiples puntos de pegamento (g....

Discusión

La migración neuronal en el RMS es un componente esencial de la neurogénesis postnatal en los bulbos olfatorios ^1. La migración a través de la RMS se produce en un plano tangente a la superficie del cerebro. Neuroblastos tangencialmente la migración son diferentes de forma radial migración de las células basadas en la ubicación de la fuente de progenitores, así como el destino divergente de sus productos finales neuronal ^{1, 2, 3.} La población relativamente pura de células que migran tangencialmente.......