Summary

Subkutan Infektion med meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA)

Published: February 09, 2011
doi:

Summary

Murina hud-och mjukdelsinfektioner Modellen används för bedömning av virulens funktion av meticillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) och den mottagande svar immunologiska. Här presenterade vi en subkutan infektion modell för hud-och mjukdelsinfektioner.

Abstract

MRSA är ett globalt hot mot folkhälsan, och MRSA hud-och mjukdelsinfektioner står nu för mer än hälften av alla mjukdelsinfektioner i USA. Bland mjukdelsinfektioner, har myosit, pyomyositis och nekrotiserande fasciit varit allt rapporterats i samband med MRSA som härrör från gemenskapen. För att förstå samspelet mellan MRSA och värd immunitet som leder till mer allvarlig infektion, är tillgången på djurmodeller kritiska, vilket möjliggör studier av värd och bakteriella faktorer. Flera infektion modeller har införts för att bedöma patogenes av S. aureus under ytlig hudinfektion. Här beskriver vi en subkutan infektion modell som undersöker huden, subkutan och sjukdomar muskler.

Protocol

1. Förbereda MRSA för Infection (två dagar före infektion) Inokulera en ögla med MRSA från ett bestånd kultur till en blodagar (trypticase soja-agar (TSA)) plattan. Kontrollera hemolys fenotyp (en klar zon runt varje koloni) på blodagar plattan. Välj en koloni som har en hemolytisk fenotyp som är förenlig med andra experiment. Inokulera kolonin i 3 ml Todd Hewitt buljong (THB), med beslag antibiotika vid behov, i ett 15 ml snap-begränsade rör. Inkubera vid …

Discussion

  1. Den murina hud-och mjukdelsinfektioner modell är ett kraftfullt verktyg för in vivo virulens bedömning av en patogen. Den patogenicitet av S. aureus i hud och mjukdelar infektion kan variera beroende på ett antal parametrar. Dessa inkluderar inokulatets storlek, bakterietillväxt fas, djup inympning, ålder på möss, och musen genetisk bakgrund 7, 8. Vid undersökningen av virulens funktion med hjälp av denna modell är det viktigt att kontrollera för dessa parametrar för att säkerställa att resul…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Detta arbete stöddes av en Burroughs-Wellcome Karriär Award och av National Institutes of Health bidrag AI074832 till GY Liu.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
THB   VWR 95025-314  
DPBS   Invitrogen 21-031-CV  
1 ml syringe   BD 309602  
27G1/2 needle   BD 305109  
Sheep Blood Agar (TSA)   VWR 90004-328  

References

  1. Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan. FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).
  2. Girish, V., Vijayalakshmi, A. Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ. Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).
  3. Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections. Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).
  4. Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).
  5. Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. a. r. r. e. n., Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA. Science. 293, 2266-2269 (2001).
  6. Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence. J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).
  7. Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury. PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).
  8. von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model. Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).
check_url/2528?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Tseng, C. W., Sanchez-Martinez, M., Arruda, A., Liu, G. Y. Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA). J. Vis. Exp. (48), e2528, doi:10.3791/2528 (2011).

View Video