Omvandling av Plasmid DNA i E. coli med metoden Heat Shock

Abstract

Omvandling av plasmid DNA i E. coli med metoden värmechock är en grundläggande teknik för molekylärbiologi. Den består av föra in en främmande plasmid eller ligatur produkt i bakterier. Denna video protokoll beskriver den traditionella metoden för omvandling med hjälp av kommersiellt tillgängliga kemiskt behöriga bakterier från Genlantis. Efter en kort inkubation i is, är en blandning av kemiskt behöriga bakterier och DNA placeras på 42 ° C i 45 sekunder (heat shock) och placeras sedan tillbaka i is. SOC media läggs och förvandlas cellerna inkuberas vid 37 ° C i 30 min med agitation. För att vara säker på att isolera kolonier oavsett omvandlingseffektiviteten är två mängder förvandlade bakterier pläterade. Denna traditionella protokollet kan användas framgångsrikt för att omvandla de flesta kommersiellt tillgängliga behöriga bakterier. Den turbocells från Genlantis kan också användas på ett nytt 3-minuters omvandling protokoll, som beskrivs i bruksanvisningen.