इस अनुच्छेद में, हम एडिनो – जुड़े वायरस मानव यकृत कैंसर की कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए सबसे कुशल वेक्टर के रूप में 3 (AAV3) सीरोटाइप की पहचान का वर्णन करता है.
पुनः संयोजक एक गैर रोगजनक मानव parvovirus पर आधारित वैक्टर, एडिनो – जुड़े वायरस (2 AAV2) विकसित किया गया है, और जीन थेरेपी के नैदानिक परीक्षणों के एक नंबर में वर्तमान में उपयोग में हैं. हाल ही में, अतिरिक्त AAV सीरमप्रकारों की एक संख्या भी अलग – थलग किया गया है, जो विभिन्न छोटे और बड़े जानवर एक मॉडल में ऊतक tropism चयनात्मक प्रदर्शन दिखाया गया है. 10 सबसे अधिक इस्तेमाल किया AAV सीरमप्रकारों, AAV3 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से इन विट्रो में vivo में कोशिकाओं और ऊतकों transducing में कुशल कम से कम दूर है.
हालांकि, हमारे हाल ही में प्रकाशित एक अध्ययन में, हम प्रलेखित है कि AAV3 वैक्टर मानव यकृत कैंसर transduce – hepatoblastoma (एचबी) और hepatocellular कार्सिनोमा (एचसीसी) – सेल लाइनों अत्यंत कुशलता क्योंकि AAV3 बाइंडिंग के लिए सेलुलर सह रिसेप्टर के रूप में इस्तेमाल मानव hepatocyte वृद्धि कारक रिसेप्टर इन 2,3 कोशिकाओं में प्रवेश और.
इस अनुच्छेद में, हम पुनः संयोजक AAV3 एक पत्रकार जीन ले जाने वैक्टर द्वारा मानव यकृत कैंसर की कोशिकाओं के पारगमन उच्च दक्षता प्राप्त करने के लिए आवश्यक कदम का वर्णन. रीकॉम्बीनैंट AAV3 एक चिकित्सकीय जीन ले जाने वैक्टर उपयोग अंततः मानव में जिगर के कैंसर के संभावित जीन थेरेपी के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.
पुनः संयोजक गैर रोगजनक मानव parvovirus, एडिनो – जुड़े वायरस (AAV) पर आधारित वैक्टर विकसित किया गया है, और जीन थेरेपी के नैदानिक परीक्षण 5 का एक संख्या में उपयोग वर्तमान में कर रहे हैं. इससे पहले, 10 सबसे अधिक इस्तेमाल किया AAV सीरमप्रकारों के सामान्य में AAV3 वैक्टर पारगमन क्षमता दोनों इन विट्रो में और vivo में 1, विशेष रूप से कम सूचित किया गया है. हालांकि, हमारे हाल ही के अवलोकन है कि AAV3 transduce मानव यकृत कैंसर कोशिका लाइनों को बेहद अच्छी तरह वैक्टर, के रूप में प्रवाह cytometry 2 द्वारा मात्रात्मक निर्धारित है, और कि AAV3 बंधन और इन में प्रवेश के लिए एक सेलुलर सह रिसेप्टर के रूप में मानव hepatocyte वृद्धि कारक रिसेप्टर (hHGFR) का इस्तेमाल 3 कोशिकाओं, दृढ़ता से विशेष रूप से सामान्य में मानव जिगर की कोशिकाओं के लिए एक चयनात्मक AAV3 के ऊतक tropism, और मानव यकृत कैंसर की कोशिकाओं का सुझाव देते हैं. हालांकि, बाद से AAV3 वैक्टर भी सामान्य मानव hepatocytes 2 कुशलता transduce, उनके vivo में कैंसर जीन थेरेपी आवेदन में संभावित उपयोग नकारात्मक असर पड़ा होगा. एक संभावित रणनीति इस संभावित समस्या को दरकिनार शामिल transcriptional लक्ष्यीकरण है कि चुनिंदा ट्यूमर द्वारा निर्मित है एक जीन उत्पाद की पहचान के द्वारा कैंसर की कोशिकाओं की सामान्य hepatocytes से नहीं बल्कि. उदाहरण के लिए, पिछले अध्ययनों से पता चला है कि α fetoprotein (एएफपी) के सीरम स्तर उपस्थिति, प्रगति, और / या जिगर के कैंसर के कुछ प्रकार के reoccurrence पर नज़र रखने के लिए एक विशिष्ट मार्कर के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं, क्योंकि सामान्य hepatocytes आम तौर पर की बहुत छोटी मात्रा का उत्पादन इस प्रोटीन. दरअसल, हम AAV3 एएफपी प्रमोटर युक्त यकृत कैंसर की कोशिकाओं में transgene अभिव्यक्ति लक्ष्य वैक्टर का इस्तेमाल किया है, लेकिन सामान्य 2 hepatocytes, और अध्ययन में नहीं वर्तमान में कर रहे हैं यकृत कैंसर का एक murine xenograft मॉडल में इस दृष्टिकोण की प्रभावकारिता का परीक्षण चल रहा. हमारे अतिरिक्त अध्ययन में, हम देखा है कि विभिन्न AAV सीरोटाइप वैक्टर के पारगमन क्षमता काफी साइट निर्देशित 6-14 वायरल capsids में सतह उजागर tyrosine अवशेषों के mutagenesis के द्वारा संवर्धित किया जा सकता है है . चूंकि 6 7 की सतह उजागर tyrosines भी AAV3 में संरक्षित कर रहे हैं, हम साइट निर्देशित इन अवशेषों के mutagenesis प्रदर्शन किया है और कहा है कि tyrosine उत्परिवर्ती AAV3 वैक्टर पारगमन क्षमता मानव यकृत कैंसर की कोशिकाओं (अप्रकाशित डेटा) में काफी बढ़ाया है. अध्ययनों से यह भी वर्तमान और tyrosine उत्परिवर्ती मानव hepatoblastoma और hepatocellular कार्सिनोमा के लिए माउस xenograft मॉडल में AAV3 वैक्टर की सुरक्षा और प्रभावकारिता का मूल्यांकन चल रहा है, और अगर सफल, इष्टतम tyrosine उत्परिवर्ती AAV3 सीरोटाइप वैक्टर मानव यकृत को लक्षित करने के लिए उपयोगी साबित हो सकता है संभावित जीन थेरेपी के लिए कैंसर.
The authors have nothing to disclose.
हम डीआरएस धन्यवाद. आर जूदास Samulski और रीकॉम्बीनैंट AAV3 और AAV-EGFP plasmids, क्रमशः, और डॉ. गैल Tomlinson की उदारता Hep293TT कोशिकाओं प्रदान करने के लिए अपने तरह के तोहफे के लिए जिओ जिओ. इस शोध में भाग सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा अनुदान अनुदान HL-076,901 R01, R01 HL 097,088, और P01 डी.के. +०५८३२७ (परियोजना 1) राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान से (के लिए के रूप में) द्वारा समर्थित किया गया.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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DMEM | Cellgro | 10-0170CM | ||
PEI | Polysciences | 23966 | ||
Benzonase | Novagen | 70664-3 | ||
HiTrap Q HP column | GE Healthcare | 17-1154-01 | ||
Salmon sperm DNA | Fisher | NC9753983 | ||
Iodixanol gradient | OptiPrep | 1114542 | ||
G-50 Columns | GE Healthcare | 27-5330-01 |