En enkel analys för att mäta de sederande effekterna av etanol på<em> Drosophila</em> Flugor, baserat på förlust av rätande reflex, beskrivs.
Låga doser av etanol orsakar flugor att bli hyperaktiva, medan höga doser lugnande. Känsligheten för etanol-inducerad sedering av en viss fluga stam är korrelerad med den stam är etanol önskemål, och därför sedering är en mycket viktig åtgärd för att studera genetiken av alkohol svar och dricka. Vi visar ett enkelt sätt att exponera flyger till etanol och mäta dess berusande effekter. Analysen beskriver vi kan bestämma akut känslighet, samt etanol tolerans induceras av upprepad exponering. Det kräver inte ett tekniskt involverad setup, och kan därför tillämpas på alla laboratorier med grundläggande verktyg flyga kultur.
I denna presentation har vi sammanställt ett enkelt sätt att avgöra etanol-inducerad berusning baserade på tidigare analyser som beskrivs av Bainton et al. 2000 1, och Rothenfluh et al. 2006 2. Eftersom alkohol-inducerad sedering är korrelerad med alkohol dricker föredrar 3, är detta test är relevanta för studier av sjukdomar alkohol. Analysen som beskrivs bygger på skrämsel-inducerade negativa geotaxis, och hur en alkohol exponering stör denna medfödda svar. Innan exponeringar, se till att alla dina flugor visar en normal reaktion på en sådan skrämma, dvs efter att knacka ner flugor i maten flaskan, bör de alla flytta upp från botten i en 10 sekunders observationstid. Exempel på flugor som har minskad negativ geotaxis inkluderar bang-känsliga beslag mutanter 5, och rörelseorgan-brist flugor orsakas av degeneration av dopaminneuron 6.
Även om den beskrivna analysen är relativt enkel, två variabler förtjänar mest uppmärksamhet för att säkerställa reproducerbara resultat. Först bör alla exponeringen flaskor vara samma volym. Detta inkluderar att se till att botten av flaskan innehåller samma mängd mat + injektionsflaska plug / bomullstuss, samt att sätta in etanol innehåller plugg samma avstånd för varje flaska. En helt tomma flaskan kan användas för denna analys, men det leder till längre ST50 värden, minskar genomströmningen av analysen.
Denna analys är också lämpligt att fastställa beloppet av tolerans flugor utvecklas vid upprepad etanol exponering. Ett antal variabler bör beaktas när man gör upprepade exponeringar. För det första är mellan exponeringen intervallet här beskrivas som 4 timmar. Denna variabel kan ändras, men vi rekommenderar det inte vara lägre än 2 timmar, för att säkerställa clearance av etanol från den första exponeringen. Se Scholz et al. 2000 4 för kinetiken av etanol tolerans utveckling och förfall. Den andra variabeln att tänka på är längden på den första exponeringen. Detta har givetvis vara samma för kontroll och den experimentella flugor. Detta kan dock inte resultera i samma mängd etanol som levereras till båda dessa flyga stammar. Sederade flugor absorberar mer etanol än aktiva flyger två, alltså en stam som sedates tidigare kan få en högre dos än senare-sederande stam, och därigenom utveckla mer tolerans på grund av en högre initial dos. Vi försiktighet starkt läsaren när man jämför tolerans utveckling av stammar som visar skillnader i den initiala ST50 (1).
Analysen beskriver vi här är ett användbart verktyg för att enkelt och reproducerbart bestämma flyger beteendemässiga reaktioner på alkohol.
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar Aylin Rodan för kritisk läsning av manuskriptet, och medlemmar av labb för bra diskussion. Denna forskning stöds av NIH, R01AA019526.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Exposure vials | www.flystuff.com | 32-116 | ||
Plugs | www.flystuff.com | 49-102 | ||
Acid Blue 9 | Sigma | 861146 |