Borrelia studier kräver ofta generering av fästingar infekterade med patogenen Borrelia burgdorferi, en process som normalt tar flera veckor. Här visar vi ett mikroinjektion-baserat förfarande kryssa infektion som kan uppnås inom några timmar. Vi visar också en immunofluorescens metod för in situ lokalisering av B. burgdorferi inom fästingar.
Borrelia orsakas av infektion med spirochete patogenen Borrelia burgdorferi, som upprätthålls i naturen av en fästing-gnagare infektion cykel 1. En fästingburna murin modell 2 har utvecklats för att studera borrelia i laboratoriet. Medan naiva fästingar kan vara infekterade med B. burgdorferi genom att utfodra dem på infekterade möss tar ömsat processen flera veckor till månader att slutföra. Därför är utveckling av snabbare och effektivare metoder fästing infektion, till exempel en mikroinjektion-baserat förfarande, ett viktigt verktyg för studiet av borrelia 3,4. Förfarandet kräver bara timmar för att generera infekterade fästingar och tillåter kontroll över leverans av lika mängder av spiroketer i en kohort av fästingar. Detta är särskilt viktigt eftersom den generation av B. burgdorferi infekterade fästingar av naturliga utfodring processen med hjälp av möss som underlåter att garantera 100% smittade och eventuellt resulterar i variation av sjukdomsalstrande bördan mellan matas fästingar. Dessutom kan mikroinjektion användas för att infektera fästingar med B. burgdorferi isolat i de fall då en försvagad stam är oförmögen att etablera infektion hos möss och kan därför inte vara naturligt förvärvas av fästingar 5. Denna teknik kan också användas för att leverera en mängd andra biologiska material till fästingar, till exempel specifika antikroppar eller dubbelsträngat RNA 6. I denna artikel kommer vi att visa mikroinjektion av nymphal fästingar med in vitro-odlade B. burgdorferi. Vi kommer också att beskriva en metod för lokalisering av borrelia patogener i fästingen tarmen med hjälp av konfokal immunofluorescens mikroskopi.
Här visar vi ett mikroinjektion-baserat förfarande för snabb och effektiv infektion av nymphal Ixodes fästingar med bakteriell patogen B. burgdorferi. Vi beskriver också en konfokala immunofluorescens förfarande för detektion av B. burgdorferi i fästingen tarmen på plats. Trots att vår demonstration innebär nymphal tarmen, liknande förfaranden gäller också för andra utvecklingsstadier av fästingar, som larv eller vuxna 8,9. Men på grund av sin storlek kan tekniken v…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar uppriktigt medlemmar i Pal laboratorium för hjälp med utarbetandet av denna demonstration. Denna studie stöddes av PHS bidrag AI076684 och AI080615 från NIH / NIAID.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |