Vi etablerte en roman murine modell av en hengende vekt system for portalen triade okklusjon. Denne teknikken kan være nyttig for fremtidige undersøkelser av iskemi i murine hepatiske modeller.
Akutt leverskade på grunn av iskemi kan oppstå under flere kliniske prosedyrer f.eks levertransplantasjon, nedsatt svulst reseksjon eller traumer reparasjon og kan resultere i leversvikt som har en høy dødelighet 1-2. Derfor murine studier av nedsatt iskemi har blitt en viktig forskningsfelt ved å gi mulighet til å utnytte farmakologiske og genetiske studier 3-9. Spesielt betingede mus med vev spesifikk sletting av et gen (CRE, flox system) gir innsikt i rollen som proteiner i bestemte vev 10-13. På grunn av tekniske problemer forbundet med manuelt fastspenning portalen triaden i mus, utførte vi en systematisk evaluering ved hjelp av en hengende vekt system for portalen triaden okklusjon som har blitt beskrevet tidligere tre. Ved å bruke en hengende vekt system legger vi en sutur rundt venstre grenen av portalen triaden uten å forårsake noen skade på hepatiske lobes, ettersom ogsåfineste klemmer tilgjengelig kan føre til nedsatt vevsskade på grunn av den nære plasseringen av leveren vev til fartøyene. Videre er det rett grenen av nedsatt triaden fortsatt perfused dermed ingen intestinal lunger forekommer med denne teknikken som blodtilførselen til de riktige hepatiske lobes er bevart. Videre er portalen triaden eneste manipulert en gang gjennom hele kirurgiske prosedyren. Som et resultat av prosedyrer liker pre-condition, med korte perioder med iskemi og reperfusjon, kan lett utføres. Systematisk evaluering av denne modellen ved å utføre ulike iskemi og reperfusjon ganger viste en nær sammenheng med nedsatt iskemi tid med leverskade målt ved alanin (ALT) og aspartat (AST) aminotransferase i serum 3,9. Samlet utgjør disse studier bekrefter svært reproduserbare leverskade ved bruk av henging vekt system for nedsatt iskemi og periodisk reperfusjon. Dermed kan denne teknikken være nyttig for andre etterforskere interesseed i leveren iskemi studier på mus. Derfor videoklippet gir en detaljert steg-for-steg beskrivelse av denne teknikken.
Denne studien beskriver en teknikk for å utføre iskemi i en murine modell ved hjelp av en hengende vekt system for okklusjon av venstre nedsatt portalen triade. Selv om det er en enkel metode for å lære følgende fallgruver bør tas i betraktning. En svært vanlig feil i begynnelsen er en dyp maske som inkluderer portalen triaden og vena cava. Den pust og puls vil avta i løpet av 15 minutter på grunn av økt motstand og nedgangen i retur blod til hjertet som resulterer i en tidlig død av musene. Den beste måten å forhindre blant annet av vena cava er å lokalisere vena cava før sting ved å holde de riktige lobes ned med en tang. En annen viktig sak er at vektene ikke er for tung som kan resultere i for mye stress på venstre og høyre portal rettssaken som også stopper blodtilførselen til de riktige fliker. Derfor mengden av vann i Eppendorf ampuller bør justeres til musen vekt og suture holdere bør plasseres distalt fra sømmen sted. På motsatt hvis vektene er til lavt blodtrykk ikke er helt stoppet. Begge feilene er lett påvises ved en ekstra farge endring blek av høyre lapp eller utilstrekkelig fargeendring av median og venstre fliker, henholdsvis. Derfor nedsatt fargeendring etter søknad vektene bør kontrolleres hvert 10. minutt. En annen vanlig kirurgisk komplikasjon er skade på leveren med nålen. Derfor retten lobes bør holdes nede med et tørt tang slik at nålespissen kan lett sees og tatt med en nål holder. Hvis disse fallgruvene i begynnelsen tas hensyn til henging vekt system for nedsatt iskemi gir en svært reproduserbar skade på grunn av iskemi ved å minimere variasjonen av leverskader assosiert med fastspenning av portalen triaden. Ved å bruke en hengende vekt system, er portalen triaden eneste manipulert en gang gjennom helekirurgisk prosedyre, forårsaker betydelig mindre skade på hepatiske fliker. I tillegg oppstår ingen lever eller tarm lunger med denne teknikken. Mer vev traumer oppstår ved å fjerne og erstatte fartøy klemmer, spesielt med reapplication av klemmen ved flere iskemi sykluser som i løpet av iskemisk prekondisjonering. Bruken av hengende vekter som er på en ekstern plassering fra leveren vev, ifølge våre observasjoner, gir fordelen av pålitelige okklusjon mens hindre vev traumer på grunn av manipulasjon av leveren lobes ved reapplication av en klemme. Til sammen gir denne studien gjennomførbarheten av de hengende vekt system for portalen triaden okklusjon under iskemi, minimere variasjonen og begrensninger knyttet til fastspenning. Derfor er denne teknikken kan være av interesse for andre forskere som mener å studere nedsatt iskemi.
The authors have nothing to disclose.
De foreliggende studiene ble støttet av USA National Institutes of Health stipend R01-HL092188, R01-DK083385 og R01HL098294, og Stiftelsen for anestesi Utdannings-og forskningsdepartementet (FAER) støtte for HKE og en DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Research Fellowship (GR2121/1- 1) og American Heart Association Grant til AG.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.