A demonstração da fabricação e uso de um eletrodo de sucção extracelular usado para medir gravações eletrofisiológicas de cordas de roedores neonatal espinhal In vitro
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Artigo de método
Spinal Cord Eletrofisiologia II: Fabricação Eletrodo de Sucção Extracelular
Neste artigo
Resumo
Resumo
Desenvolvimento de circuitos neurais e locomoção podem ser estudadas usando neonatal da medula espinhal de roedores centro gerador de padrão de comportamento (CPG). Demonstramos um método para fabricar eletrodos de sucção que são usados para examinar a atividade CPG, ou locomoção fictícia, em cabos de roedores dissecados espinhal. Os cabos de roedor da coluna vertebral são colocados no líquido cefalorraquidiano artificial e as raízes ventral são atraídos para o eletrodo de sucção. O eletrodo é construído através da modificação de um eletrodo de sucção disponível comercialmente. Um fio mais pesado de prata é usado em vez do fio padrão dado pelo eletrodo disponíveis comercialmente. A ponta do eletrodo de vidro em comercial é substituído com uma ponta de plástico para maior durabilidade. Nós preparamos mão eletrodos desenhado e eletrodos feitos de tamanhos específicos de tubos, permitindo a consistência e reprodutibilidade. Os dados são coletados por meio de um amplificador e software de aquisição neurograma. As gravações são realizadas em uma mesa de ar dentro de uma gaiola de Faraday para evitar interferências mecânicas e elétricas, respectivamente.
Protocolo
Gravações eletrofisiológicas de isolados medula espinhal pode revelar mudanças genéticas e de desenvolvimento de um circuito neural. Nós já demonstraram um método para dissecar os cabos do mouse neonatal da coluna vertebral 2. Aqui apresentamos um método para preparar eletrodos de sucção útil na gravação de locomoção fictícia na medula espinhal isolado 3.
A ponta de um eletrodo de tubos de plástico podem ser atraídos para uma ponta muito fina à mão usando uma lâmpada de álcool a baixas temperaturas 3-5. O tubo de plástico (PE90, Clay Adams Intramedic TM) é realizada sobre a chama para....
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Discussão
Desenvolvimento do sistema nervoso podem ser estudadas usando cabos isolados de roedores espinhal. Na presença de neurotransmissores, locomoção fictícia pode ser gerada a partir da medula espinhal na forma de padrões de atividade elétrica 1,3. Estas explosões rítmicas são produzidos em 0,2-0,5 Hz e são estampados em alternâncias esquerda-direita e flexores e extensores. Em diferentes estágios de desenvolvimento, a robustez e os padrões dessa atividade varia 1. Mutações genéticas também podem pertur.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Samuel L. Pfaff é professor no Laboratório de Expressão Gênica do Instituto Salk para Estudos Biológicos e um investigador no Instituto Médico Howard Hughes. Este trabalho foi financiado pelo Christopher Reeve e Dana Foundation. Joe Belcovson, Kent Schnoeker e Mike Sullivan em Recursos Multimídia do Instituto Salk prestou assistência com a fotografia e edição.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo de PTFE de Parede Fina (tubo pequeno) | Zeus | 36AWG | 0.005” ID x 0.003” de espessura (Peças pequenas). Também disponível em 0.003” a 0.006” |
| Tubo grande (0,86 mm (0,34”)) | BD Biosciences | 427420 | 0,86 mm (0,34”) de diâmetro externo, 1,27 mm (0,050”) |
| Corpo do eletrodo | A-M Systems | 573000 | |
| Adesivo | JB Weld | ||
| Adesivo: vedante de silicone | |||
| Estanho e ferro de solda | |||
| Água sanitária | |||
| Xileno | |||
| Fio de prata: 0,010” | A-M Systems | ||
| Pinças para insetos: Austerlitz 0,1 mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Suporte magnético | Narishige International | GJ-8 | |
| Micromanipulador | Narishige International | MN 151 | |
| Miniplaca (estágio de cabeça) | Grass Technologies | F-15EB/B1 | |
| Unidade adaptadora Polyview | Grass Technologies | PVA 8 | |
| Sistema amplificador fisiológico bipolar portátil | Grass Technologies | 15LT | |
| PLACA ANALÓGICA PARA DIGITAL | National Instruments | 6035E | |
| Mesa antivibratória; Vibraplane | Kinetic Systems |
Referências
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
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Reimpressões e permissões
