Биолюминесценция изображений для оценки иммунного ответа после вживления Engineered ткани сердца (EHT)
Summary
Это видео демонстрирует использование<em> В естественных условиях</em> Биолюминесценции визуализации для исследования иммунного ответа после имплантации Engineered ткани сердца (EHT) у крыс.
Abstract
Различные методы сердечных тканевой инженерии были, проводимой в последние десятилетия, в том числе леса стратегии с использованием либо родным или bioartificial эшафот материалов, захвата кардиомиоцитов в гидрогели, такие как фибрин и коллаген и укладки монослоев миоцитов 1. Эти концепции направлены на восстановление под угрозу сердечной функции (например, после инфаркта миокарда) или в качестве экспериментальных моделей (например, интеллектуального токсикологии и вещества экранирование или болезни моделирование). Точные данные мониторинга о выживаемости клеток после имплантации инженерии тканей сердца (EHT), а теперь возможно с использованием в естественных условиях биолюминесценции томография (BLI) методы 2. Здесь мы описываем процессы генерации фибрин основе EHT от трансгенных линия крыс с повсеместным выражение люциферазы светляков (ROSA / люциферазы-LEW Tg, 3). Имплантация проводится в большого сальника различных штаммов крыс для оценки иммунного ответа из организма-реципиента следующие EHT имплантации. Сравнение результатов, полученных BLI и фермента иммуноферментный Пятно Техника (ELISPOT) подтверждают удобство BLI для оценки иммунного ответа.
Protocol
Discussion
Перед клинической реализации EHT технологии для сердечной ремонт, фундаментальные вопросы, такие как иммуногенность и клеточном и матрица компонентов или выживаемость трансплантата после имплантации должны быть оценены в экспериментальных моделях. В естественных условиях биолю…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Соня Schrepfer, Ленард Конради и Арне Хансен получил финансирование от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). Работа была поддержана грантами от Европейского Союза Томас Eschenhagen (EUGeneHeart и Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
