Bioluminiscencia de imágenes para la evaluación de la respuesta inmune después de la implantación de tejido cardiaco de Ingeniería (EHT)
Summary
Este video muestra el uso del<em> In vivo</em> Imágenes de bioluminiscencia para estudiar la respuesta inmune después de la implantación de tejido cardiaco de Ingeniería (EHT) en ratas.
Abstract
Diversas técnicas de la ingeniería de tejidos cardíacos han llevado a cabo en las últimas décadas, incluidas las estrategias de andamios utilizando materiales de andamiaje o nativo o bioartificiales, el atrapamiento de los miocitos cardíacos en los hidrogeles, como la fibrina o el colágeno y el apilamiento de las monocapas miocitos 1. Estos conceptos tienen por objeto la restauración de compromiso de la función cardíaca (por ejemplo después de un infarto de miocardio) o como modelos experimentales (por ejemplo, toxicología predictiva y la detección de sustancias o modelos de enfermedad). Un control preciso de la supervivencia celular después de la implantación del tejido del corazón de ingeniería (EHT) se ha convertido en posible con in-vivo de imágenes de bioluminiscencia (BLI) técnicas 2. A continuación se describe la generación de fibrina, basado en EHT a partir de una cepa de rata transgénicos con expresión ubicua de la luciferasa de luciérnaga (ROSA / Tg luciferasa-ASE, 3). La implantación se realiza en el epiplón mayor de cepas de ratas diferentes para evaluar la respuesta inmune del organismo receptor después de la implantación EHT. Comparación de los resultados generados por BLI y la enzima técnica vinculada al contado Inmuno (ELISPOT) confirman la utilidad de BLI para la evaluación de la respuesta inmune.
Protocol
Discussion
Antes de la aplicación clínica de la tecnología EHT para la reparación cardiaca, las preguntas fundamentales tales como la inmunogenicidad de los componentes celulares y la matriz o la supervivencia del injerto después de la implantación deben ser evaluados en modelos experimentales. In vivo imágenes de bioluminiscencia representa una técnica nueva y útil para la supervivencia de la célula de seguimiento tras el trasplante . Hemos logrado generar fibrina basado en EHT contiene luciferasa positivo (luc…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Conradi Lenard y Arne Hansen recibió fondos de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). El trabajo también fue apoyado por subvenciones de la Unión Europea a Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart y Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
