मानव तंत्रिका स्टेम सेल की गिनती
Summary
कई टिशू कल्चर जोड़तोड़ के लिए व्यवहार्य कोशिकाओं की सही संख्या का ज्ञान आवश्यक है. इस प्रोटोकॉल का वर्णन करता है कैसे रहते हैं और मृत कोशिकाओं के बीच अंतर करने के लिए और एक hemacytometer का उपयोग कर कक्षों यों. हालांकि यह मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत साबित कोशिकाओं (hNSPCs) की गिनती का वर्णन है, यह अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Abstract
Immunocytochemistry के लिए या सेल transfections के लिए चढ़ाना कोशिकाओं के रूप में कई नियमित टिशू कल्चर जोड़तोड़, के लिए एक सेल निलंबन की एक निश्चित मात्रा में व्यवहार्य कोशिकाओं की सही संख्या का ज्ञान आवश्यक है. इस प्रोटोकॉल रहते हैं और मृत कोशिकाओं और सेल एकाग्रता और कुल सेल एक hemacytometer का उपयोग कर संख्या बढ़ाता के बीच फर्क करने के लिए एक सरल और तेजी से विधि का वर्णन करता है. यह प्रक्रिया पहली बार एक वृद्धि की सतह से कोशिकाओं और उन्हें मीडिया में resuspending detaching की आवश्यकता है. अगला, कोशिकाओं Trypan नीला (एक एकाग्रता है कि वृत्त का चतुर्थ भाग प्रति 20-50 कोशिकाओं देंगे आदर्श) के एक समाधान में पतला कर रहे हैं और hemacytometer में रखा. अंत में, कई बेतरतीब ढंग से चुनी गई quadrants में व्यवहार्य कोशिकाओं के औसत मायने रखता है, एक 1 मिमी 2 (0.1 μl) वृत्त का चतुर्थ भाग और कमजोर पड़ने कारक से गुणा की मात्रा से विभाजित औसत एल प्रति कोशिकाओं की संख्या देता है Μl में कुल मात्रा द्वारा इस सेल एकाग्रता गुणा कुल सेल नंबर देता है. इस प्रोटोकॉल मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत साबित कोशिकाओं (hNSPCs) की गिनती का वर्णन है, लेकिन यह भी कई अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
यह एक सरल और तेजी से कोशिकाओं शामिल प्रयोगों की एक किस्म के लिए सेल एकाग्रता का निर्धारण करने के प्रोटोकॉल का वर्णन करता है. 3 डी में वर्णित शॉर्टकट का उपयोग करना, एक जल्दी और सही सेल एकाग्रता और एक निश्चित मात्र…
Acknowledgements
लेखकों के लिए बच्चों के अस्पताल, ऑरेंज काउंटी hNSPC संस्कृतियों प्रदान करने के लिए अनुसंधान संस्थान में राष्ट्रीय मानव तंत्रिका स्टेम सेल संसाधन के डॉ. फिलिप एच. Schwartz स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
References
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
