हम एक माउस ES सेल आधारित परख का उपयोग करने के लिए Wnt / बीटा catenin और बीएमपी हृदयजनित अधिष्ठापन के दौरान संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान का वर्णन. विधि एक मानकीकृत मंच है कि मज़बूती से हृदयजनित दक्षता quantifies प्रदान करता है, और अन्य सेल प्रजातियों के अध्ययन के लिए लागू होता है.
Pluripotent स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव कस एकाधिक कुंजी संकेत रास्ते के अस्थायी और स्थानिक विनियमन द्वारा नियंत्रित किया जाता है. अपनी समझ के लिए एक बाधा दौड़ के भेदभाव दक्षता की कुंजी संकेत घटनाओं के परिवर्तन correlating में विभिन्न तरीकों किया गया है. हम यहाँ एक माउस भ्रूण स्टेम (ते) सेल आधारित परख का उपयोग करने के लिए Wnt / बीटा catenin और बीएमपी हृदयजनित अधिष्ठापन के दौरान संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान का वर्णन. एक 96 अच्छी तरह से थाली प्रारूप में भ्रूण निकायों (ईबीएस) करार के लिए स्कोरिंग, हम जल्दी से हृदयजनित दक्षता यों और Wnt / बीटा catenin और बीएमपी विशिष्ट न्यूनाधिक उपचार के बाद एक बार पाठ्यक्रम में संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान कर सकते हैं. प्रिंसिपल यहाँ उल्लिखित हृदय प्रेरण अकेले नहीं सीमित है, और कई अन्य सेल प्रजातियों के अध्ययन की दिशा में लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, 96 अच्छी तरह प्रारूप के आगे एक उच्च throughput, स्वचालित परख करने के लिए अधिक परिष्कृत प्रयोगात्मक परिकल्पना के परीक्षण के लिए अनुमति के रूप में विकसित किया जा क्षमता है.
फांसी ड्रॉप विधि पारंपरिक EB गठन के लिए और इन विट्रो भेदभाव में विधि का इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, यह श्रमसाध्य है और प्रयोगात्मक लचीलापन सैन्य चिंताओं के कारण सीमा है. द्वारा एक ही टोकन, परिणाम भी अधिक मान्य करने के लिए मुश्किल experimenter के कौशल के रूप में सफल EB गठन और फांसी बूंदों के रूप में हेरफेर करने के लिए महत्वपूर्ण है. एक सरल विधि के एक दौर तली एक एकल कदम प्रक्रिया के रूप में 96 अच्छी तरह से थाली में ईबीएस फार्म है. इस स्वरूप इन विट्रो भेदभाव में अनुमति देता है के लिए मानकीकृत हो और अधिक प्रयोगात्मक EB गठन और बहाव हेरफेर (जैसे न्यूनाधिक इसके अलावा या हटाने) की आसानी के कारण स्थिति को समायोजित कर सकते हैं. इसके अलावा, 96 अच्छी तरह से थाली स्वरूप माउस ES कोशिकाओं में एक कुशल स्क्रीनिंग उपकरण किया जा करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
The authors have nothing to disclose.
इस काम के दिग्गजों मामलों और NIH 5U01HL100398 और 1R01HL104040 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.