Injektionsstället och Hemolymph Extraction till Mät insulinkänsligheten hos vuxna Drosophila melanogaster</em
Summary
Bevaras insulin signalvägar finns i bananfluga<em> Drosophila melanogaster</em> Gör denna organism ett potentiellt verktyg för modellering metabola sjukdomar inklusive diabetes typ II. I detta syfte är det viktigt att skapa fysiologiska tester för att effektivt mäta systemisk insulin åtgärder i perifert omhändertagande av glukos i den vuxna flugan.
Abstract
Bevaras näringsämnen avkänning mekanismer finns mellan däggdjur och fruktflugor där peptider som liknar däggdjur insulin och glukagon, respektive funktion att upprätthålla glukoshomeostas under utveckling larvstadier 1,2. Studier på i stort sett efter mitotiska vuxna flugor har visat störning av glukos homeostas som resultat av genetiska ablation av insulin-like peptid (IUP) som producerar celler (IPC) 3. Således vuxna bananflugor är mycket lovande som ett lämpligt genetiska modellsystem för metabola sjukdomar inklusive diabetes typ II. För att ytterligare utveckla systemet bananfluga, måste jämföras fysiologiska test som används för att mäta glukostolerans och insulinkänslighet i däggdjur fastställas. För detta ändamål har vi nyligen beskrivit en ny procedur för att mäta muntliga svar glukostolerans i den vuxna flugan och påvisade betydelsen av vuxna IPC upprätthålla glukoshomeostas 4,5. Här har vi ändrat ett tidigare beskrivits förfarande för insulin injektion 6 och kombinerat det med en roman hemolymph extraktion metod för att mäta perifer insulinkänslighet i den vuxna flugan. Unikt, gör att våra protokoll direkta fysiologiska mätningar av den vuxna flugan förmåga att avyttra en perifer glukosbelastning vid injektionsstället, en metod som gör det möjligt att karakterisera insulin signalering mutanter och eventuella ingrepp som påverkar glukostolerans och insulinkänslighet i den vuxna flugan.
Protocol
Discussion
Tekniken beskrivs i denna rapport kan vara användbar i någon studie som undersöker fysiologiska processer som leder till mätbara förändringar i Drosophila hemolymph sammansättning. Genom att kombinera injektion och hemolymph samling på detta sätt är det möjligt att fastställa de omedelbara fysiologiskt relevanta effekter av en viss experimentell behandling eller manipulation. Den främsta fördelen med denna "åderlåtning" tekniken i hemolymph kollektionen jämfört med tidigare tekniker …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats med bidrag från NIA till YW.CF (AG21068, AG31086).
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Bovine insulin | Sigma | I5500 |
| Infinity Glucose Reagent | Thermo Electron Corporation | TR1541 |
| Manual microinjector | Sutter Instrument | |
| P-87 Flamming/Brown micropipette puller | Sutter Instrument | |
| Single barrel borosilicate capillary glass | A-M Systems | 626000 |
| FD&C Blue No. 1 | McCormick & Company | |
| 1 μl microcapillary tubes | Drummond | |
| Three-axis manual micromanipulator and base | World Precision Instruments |
References
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora cardiaca cells. Nature. 431, 316-316 (2004).
- Broughton, S. J. Longer lifespan, altered metabolism, and stress resistance in Drosophila from ablation of cells making insulin-like ligands. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 3105-3105 (2005).
- Haselton, A. Partial ablation of adult Drosophila insulin-producing neurons modulates glucose homeostasis and extends life span without insulin resistance. Cell Cycle. 9, 3063-3063 (2010).
- Haselton, A. T., Fridell, Y. W. Adult Drosophila melanogaster as a model for the study of glucose homeostasis. Aging (Albany NY). 2, 523-523 (2010).
- Belgacem, Y. H., Martin, J. R. Disruption of insulin pathways alters trehalose level and abolishes sexual dimorphism in locomotor activity in Drosophila. J Neurobiol. 66, 19-19 (2006).
- Demerec, M. . Biology of Drosophila. , (1950).
