بروتوكول لجمع ويلطخ Hemocytes من الحمى الصفراء البعوض الزاعجة المصرية</em
Summary
وبعد دقيقة طريقة مبسطة لجمع وصمة عار hemocytes البعوض هو موضح. لدينا وسيلة تجمع بين بساطة نضح مع دقة عالية لتقنيات الحقن عزل الاستعدادات نظيف hemocytes الزاعجة في البعوض. هذه الطريقة تسهل الدراسات تتطلب معرفة أنواع hemocytes والوفرة.
Abstract
البعوض الناقل لعدد من العوامل الممرضة المسببة للأمراض مثل فيروس الحمى الصفراء والملاريا الطفيليات والديدان الفيلاريا. مختبرات يحققون مكافحة الممرض مكونات الجهاز المناعي في الأنواع الفطرية ناقلات الأمراض على أمل توليد البعوض المعدلة وراثيا التي يتم صهر لمسببات الأمراض مثل 1 و 2. نظام المناعة الفطري للبعوض وتتألف من عدة خطوط للدفاع 3. مسببات الأمراض التي تدير هربا من الحاجز الذي فرضته البعوض ظهارة مبطنة المعي المتوسط 4 أدخل الدملمف واللقاء hemocytes المتداولة ، والمكونات الخلوية الهامة التي تغلف ومسببات الأمراض بابتلاع 5 ، 6. الباحثين لم يجدوا دليلا على الأنسجة المكونة للدم في البعوض والأدلة الحالية تشير إلى أن يتم إصلاح عدد من hemocytes في ظهور الكبار والأرقام قد تراجع فعلا مثل البعوض الأعمار 7. القدرة على جمع بشكل صحيح وتحديد hemocytes من الحشرات الهامة طبيا هو خطوة أساسية للدراسات في المناعة الخلوية. ومع ذلك ، فإن صغر حجم البعوض ومحدودية حجم الدملمف تشكل تحديا لجمع الخلايا المناعية.
طريقتين التي أنشئت لجمع hemocytes تشمل طرد البعوض الدملمف من 8 قطع خرطوم ، والتشريد وحدة التخزين (التروية) ، حيث يتم حقن المياه المالحة في المنطقة necklike الغشائي بين الرأس والصدر (أي وعنق الرحم) ، ويتم جمع الدملمف perfused من فتح في منطقة مزقتها القاصية من البطن 9 و 10. هذه التقنيات ، مع ذلك ، هي محدودة بسبب انخفاض الانتعاش hemocytes وتلوث محتمل من قبل خلايا الجسم من الدهون ، 11 على التوالي. في الآونة الأخيرة أشارت إلى أنه أسلوب الحقن الانتعاش / استرداد عالية تحسين immunocytes باستخدام مخازن للتخثر في حين خفض مستويات تلوث الجداول والأنسجة الداخلية 11. في حين أن هذا الأسلوب يسمح للطريقة محسنة لجمع وصيانة hemocytes الأساسي للثقافة ، فإنه ينطوي على عدد من الحقن وجمع الخطوات التي ليست ضرورية إذا كان الهدف هو جمع المصب ، وإصلاح وصمة عار hemocytes للتشخيص. هنا ، علينا أن نظهر لدينا وسيلة لجمع الدملمف البعوض الذي يجمع بين البساطة في الارواء ، وذلك باستخدام مخازن للتخثر في مكان من المحلول الملحي ، مع دقة عالية لتقنيات الحقن عزل الاستعدادات نظيف hemocytes الزاعجة في البعوض.
Protocol
Discussion
وصف طريقة جمع كرية دموية هنا هو معدلة من أساليب المنشورة سابقا ويسمح احد لعزل الاستعدادات نظيف hemocytes من البعوض الزاعجة مع عدد أقل من الخطوات. في حين تكمن مصلحتنا ولا سيما في وصف السكان كرية دموية في البعوض الزاعجة ، ونحن نعتقد أنه يمكن تطبيق هذه التقنية لمجم?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
والكتاب أود أن أشكر جون بيترسون وفري بن لتربية البعوض. ونحن نشكر أيضا كريستين ديفيس وراديس غاري للمساعدة في micrographs كرية دموية. وقد تم تمويل هذا البحث من جامعة ريتشموند في الآداب والعلوم زمالة الصيف لAA القيوم وأعضاء هيئة التدريس ألف منحة لTelang.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Schneider’s Medium | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Fetal bovine serum | Sigma-Aldrich | F0643 | |
| Hema3 stain kit | Fisher | 123-869 | |
| Glass needles (borosilicate with filament) |
Sutter Instrument | BF100-78-10 | 1.0mm O.D. and 0.78mm I.D. |
| Needle puller | Sutter Instruments | Model P-87 | |
| MicroInjector | Tritech Research | MINJ-PD | |
| Needle holder | Tritech Research | MINJ-4 |
References
- Enayati, A., Hemingway, J. Malaria management: past, present, and future. Annu. Rev. Entomol. 55, 569-569 (2010).
- Medlock, J., Luz, P. M., Struchiner, C. J., Galvani, A. P. The impact of transgenic mosquitoes on dengue virulence to humans and mosquitoes. The American Naturalist. 174, 565-565 (2009).
- Baton, L. A., Garver, L., Xi, Z., Dimopoulos, G. Functional genomics studies on the innate immunity of disease vectors. Insect Sci. 15, 15-15 (2008).
- Thomas, R. E., Wu, W. K., Verleye, D., Rai, K. S. Midgut basal lamina thickness and dengue-1 virus dissemination rates in laboratory strains of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 30, 326-326 (1993).
- Bartholomay, L. C. Profiling infection responses in the haemocytes of the mosquito, Aedes aegypti. Insect Mol. Biol. 16, 761-761 (2007).
- Strand, M. R. The insect cellular immune response. Insect Sci. 15, 1-1 (2008).
- Hillyer, J. F. Age-associated mortality in immune challenged mosquitoes (Aedes aegypti) correlates with a decrease in haemocyte numbers. Cell. Microbiol. 7, 39-39 (2005).
- Chen, C. C., Laurence, B. R. In vitro study on humoral encapsulation of microfilariae: establishment of technique and description of reaction. International Journal for Parasitology. 17, 781-781 (1987).
- Beerntsen, B. T., Christensen, B. M. Dirofilaria immitis: effects on hemolymph polypeptide synthesis in Aedes aegypti during melanotic encapsulation reactions against Microfilariae. Exp. Parasitol. 71, 406-406 (1990).
- Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. The antibacterial innate immune response by the mosquito Aedes aegypti is mediated by hemocytes and independent of Gram type and pathogenicity. Microb. Infect. 6, 448-448 (2004).
- Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti. Insect Biochem. Mol. Biol. 36, 891-891 (2006).
