हमारे प्रयोग में दिखा देंगे कि कैसे बैक्टीरियल एचआईवी पॉजिटिव रोगियों के परिधीय रक्त में translocating प्रजातियों के अनुक्रमण विश्लेषण प्रदर्शन करने के लिए.
स्वस्थ जठरांत्र संबंधी मार्ग physiologically खानेवाला रोगाणुओं कि humoral और सेलुलर mucosal प्रतिरक्षा प्रणाली 1,2 के विकास के प्रभाव का एक विशाल विविधता के द्वारा colonized है.
Microbiota एक मजबूत mucosal बाधा के माध्यम से प्रतिरक्षा प्रणाली से परिरक्षित है. संक्रमण और एंटीबायोटिक दवाओं के लिए दोनों सामान्य जठरांत्र संबंधी मार्ग बाधा है और निवासी बैक्टीरिया की संरचना है, जो संभव प्रतिरक्षा असामान्यताएं में 3 परिणाम हो सकता है बदल जाना जाता है.
एचआईवी mucosal और lipopolysaccharide और बैक्टीरियल डीएनए टुकड़े के रूप में बैक्टीरिया bioproducts, जो प्रणालीगत प्रतिरक्षा सक्रियण 4-7 योगदान के प्रणालीगत संचलन में प्रतिरक्षा रिसाव के प्रगतिशील विफलता के साथ जठरांत्र बाधा में एक दरार का कारण बनता है . माइक्रोबियल स्थानान्तरण एचआईवी / एड्स immunopathogenesis और 4,8 चिकित्सा के जवाब में फंसा है.
हम एचआईवी संक्रमित रोगियों के परिधीय रक्त में translocating बैक्टीरिया की संरचना विशेषताएँ के उद्देश्य से. हमारा उद्देश्य को आगे बढ़ाने के लिए हम panbacteric -16 ribosomial एक अनुक्रमण विश्लेषण द्वारा पीछा जीन के लिए एक पीसीआर प्रतिक्रिया सेट.
संक्षेप में, दोनों एचआईवी संक्रमित और स्वस्थ विषयों से पूरे रक्त का प्रयोग किया जाता है. यह देखते हुए कि स्वस्थ व्यक्तियों सामान्य आंत्र homeostasis वर्तमान microflora की कोई स्थानान्तरण इन रोगियों में होने की उम्मीद है. Venipuncture और प्लाज्मा जुदाई से पूरे रक्त संग्रह के बाद, डीएनए प्लाज्मा से निकाला जाता है और 9 जीन ribosomial panbacteric -16 के लिए एक व्यापक रेंज पीसीआर प्रतिक्रिया करने के लिए इस्तेमाल किया. के बाद पीसीआर उत्पाद शुद्धि, क्लोनिंग और अनुक्रमण विश्लेषण प्रदर्शन कर रहे हैं.
The authors have nothing to disclose.
हम उत्कृष्ट सहायता के लिए वीडियो बनाने के साथ Gianni Scimone के लिए आभारी हैं.
Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments (optional) |
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Easty-DNA Kit | Invitrogen | K 180001 | |
Chloroform | Sigma-Aldrich | C2432 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | E7203 | |
UltraPure Waer | Invitrogen | 10977049 | |
Lysozyme | Fluka | 62970 | 10 μg/mL in Distillated Water |
AmpliTaq Gold | Applied Biosystem | 26478701 | |
Microcon 100 | Millipore | 42413 | |
PCR primers | Invitrogen | ||
Agarose | Eppendorf | C1343 | |
DNA ladder | Invitrogen | 15628019 | |
Purelink PCR micro kit | Invitrogen | K310050 | |
LB Agar, powder | Invitrogen | 22700025 | |
Bactoagar | Invitrogen | ||
Ampicillin | Invitrogen | 11593027 | 10 mg/mL in Distillated Water |
X-gal | Invitrogen | 15520034 | 40mg/mL in DMF |
IPTG | Invitrogen | 15529019 | 100mM in Distillated water |
Topo TA cloning kit | Invitrogen | K450002 | |
Purelink Quick Plasmid Miniprep kit | Invitrogen | K210010 | |
Big dye | Applied Biosystem | 4337455 | |
DyeEx 2.0 spin kit | Qiagen | 63204 |