تحليل التدفق الخلوي للخلايا المناعية وفي الفئران Aortas

ملخص

تعرض هذه الورقة على تدفق الخلوي على أساس أسلوب التحقيق في تكوين المناعة في aortas. ورقة يوضح أيضا تقنية إضافية تسمح بدراسة البرانية المحيطة وجدار الوعاء الدموي بشكل منفصل. هذه الطريقة يفتح الاحتمالات لإجراء تحليلات phenotypical من الكريات البيض الأبهر وتطبيق المقايسات المناعية للدراسات عدة تصلب الشرايين.

الملخص

تصلب الشرايين هو عملية التهابات مزمنة من السفن المتوسطة الحجم والكبيرة التي يتميز تشكيل لويحات التي تتكون من خلايا رغوية ، وخلايا المناعة وخلايا العضلات الوعائية البطانية وسلس ، والصفائح الدموية ، المصفوفة خارج الخلية ، والدهون الأساسية الغنية مع واسعة النطاق ونخر تليف الأنسجة المحيطة بها ، ويشارك الأسلحة ⁽¹⁾ الفطرية والتكيفية للاستجابة مناعية في التنمية ، وبدء واستمرار تصلب الشرايين. ^{2 و 3} وهناك مجموعة كبيرة من الأدلة على أن مجموعات فرعية مختلفة من الخلايا المناعية مثل الخلايا البلعمية الكبيرة ، شجيري الخلايا اللمفية تي ، وباء ، موجودة داخل aortas من الفئران صحية وتصلب الشرايين المعرضة - ^4. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على خلايا المناعة في البرانية الأبهر المحيطة الأمر الذي يوحي بدور هام في هذا النسيج من تصلب الشرايين. ²

لبعض الوقت ، كانت محدودة للكشف كمية من أنواع مختلفة من الخلايا المناعية ، وضعهم التنشيط والتكوين الخلوي داخل جدار الشريان الأبهر بواسطة RT - PCR وطرق المناعى لدراسة تصلب الشرايين. بذلت محاولات قليلة لتنفيذ التدفق الخلوي باستخدام aortas الإنسان ، وعدد من المشاكل ، مثل ارتفاع تألق ذاتي ، تم الإبلاغ عن ^5،6. وهضم لويحات تصلب الشرايين مع الإنسان كولاجيناز 1 ، وجمعت الخلايا الحرة والملون لCD14 + / + CD11c لتسليط الضوء على الخلايا المشتقة من البلاعم الرغوة. في هذه الدراسة ، تم استخدام "وهمية" قناة لتجنب تلطيخ إيجابية كاذبة. ⁶ مواد نخرية المتراكمة أثناء عملية الهضم تؤدي إلى توافر كميات كبيرة من الحطام الذي يولد تألق ذاتي عالية في عينات الأبهر. لحل هذه المشكلة ، وقد اقترحت لجنة المراقبة السلبية والإيجابية ، ولكن يمكن تطبيقها فقط تلطيخ مزدوجة في هذه العينات. قمنا بتطوير التدفق الخلوي الجديد القائم على أسلوب ⁷ لتحليل تركيبة الخلايا المناعية وتميز التنشيط ، والانتشار ، والتمايز للخلايا المناعية في الشريان الأورطي صحية وتصلب الشرايين المعرضة لل. هذا الأسلوب يسمح للتحقيق في تكوين الخلايا المناعية للجدار الشريان الأبهر ويفتح احتمالات لاستخدام مجموعة واسعة من الطرق المناعية للتحقيقات جوانب المناعة من هذا المرض.

البروتوكول

1. عزلة aortas الفئران

مطلوب موافقة اللجنة المؤسسية IACUC الإجراء للعمل مع الفئران.

1. إعداد برنامج تلفزيوني heparinzed بإضافة 1000 وحدة هيبارين الصوديوم إلى PBS 50 ملم وقلب الأنبوب إلى المزيج. يعد أنبوب جمع فارغة للدم والتي تحتوي على أنبوب جمع PBS لكل الأبهر التي سيتم جمعها. إبقاء جميع الأنابيب على الجليد.
2. يعالج بالهيبارين حقنة للدم الرسم (0.1ml من 1000 هيبارين الصوديوم يو / مل) ، وإعداد الأدوات الجراحية (اثنين من أزواج من ....

المناقشة

هنا ، نقدم طريقة التدفق الخلوي قائم على التحقيق في تكوين الخلايا المناعية من aortas الفئران. الميزة الرئيسية لهذا الأسلوب هو القدرة على تحليل الخلايا المناعية الأبهر عند مستوى خلية واحدة ، وتميز الوضع تنشيط الكريات البيض الأبهر. لا يقتصر هذا الأسلوب لaortas الفئران ، ونحن (بيانات غير منشورة) وغيرهم ¹⁰ يستخدم هذا النهج لتحليل العينات البشرية مثل الشريان الثديي الداخلي ، والصمامات والشرايين التاجية الأبهر. واحد الحد من هذا الأسلوب هو الانخفاض النسبي في عدد الكريات البيض ا.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مادة	رقم كتالوج	شركة
كولاجيناز الحادي عشر	C7657	سيغما الدريخ
هيالورونيداز	H3506	سيغما الدريخ
الدناز الأول ، من النوع 2	D4527	سيغما الدريخ
أنا كولاجيناز	C0130	سيغما الدريخ
كولاجيناز الثاني	LS004174	رثينجتون مؤسسة بيوكيميائية
إيلاستاز	LS002292	رثينجتون مؤسسة بيوكيميائية