אחד תסיסנית אומטידיום Dissection והדמיה
Summary
הגורם המגביל בשימוש של המבוגר<em> תסיסנית</em> עין ללמוד ניוון מוחיים, ביולוגיה של התא הוא קשה הדמיה של תהליכים תאיים. אנו מתארים את דיסקציה של האומטידיה בודד כדי ליצור בתום-בתום תא ראשוני תרבות העצבית, אשר יכול להיות נושא לטיפול תרופתי והדמיה מתקדמים.
Abstract
זבוב הפירות דרוזופילה melanogaster תרם תרומות יקר המוח במחקר כבר בשימוש נרחב כמודל מחלות ניווניות בגלל הגנטיקה שלה עוצמה 1. העין לטוס בפרט כבר האיבר של בחירה עבור מחקר ניוון מוחיים, להיות חלק נגיש ביותר החיים dispensable של מערכת העצבים תסיסנית. עם זאת, אזהרה גדולה של העיניים שלם הוא הקושי, בגלל autofluorescence האינטנסיבי של הפיגמנט, באירועים הדמיה תאיים, כגון autophagy הדינמיקה 2, אשר עליונה הבנה של ניוון מוחיים.
השתמשנו לאחרונה לנתיחה והתרבות של האומטידיה אחד 3 כי כבר חיוני להבנת תפקוד autophagic במודל זבוב של ניוון Dentatorubro-Pallidoluysian (DRPLA) 3, 4.
כעת אנו מדווחים תיאור מקיף של טכניקה זו (איור 1), המותאמים ממחקרים אלקטרו 5, אשר צפוי להרחיב באופן משמעותי את האפשרות של מודלים לטוס ניוון מוחיים. שיטה זו יכולה להתאים לדימוי חי אירועים subcellular כדי לפקח והתרופות אפקטיבי על התאים קולטי האור (איור 2). אם בשילוב עם טכניקות פסיפס 6-8, התגובות של תאים שונים גנטית יכול להיות assayed במקביל (איור 2).
Protocol
Discussion
דיסקציה אומטידיום יחיד המוצגת כאן מאפשרת איסוף מידע התא עמוק יותר על תהליכים ביולוגיים כמו ניוון מוחיים, כאשר הדגם בעין תסיסנית. הנוירונים הם photoreceptor נגיש יותר בקלות מאשר נוירונים אחרים והם הציטופלסמה הוא גדול במיוחד, מתאים ובכך ללמוד הדינמיקה שלפוחית, בתאי בדי…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים ברנרד Charroux לדיונים. עבודה זו מומנה על ידי בית הספר ביו KCl.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
References
- Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
- Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
- Nisoli, I. Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy. Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).
- Charroux, B., Fanto, M. The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration. Autophagy. 6, 667-669 (2010).
- Hardie, R. C. Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors. J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).
- Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
- Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila. Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).
- Napoletano, F. Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat. The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).
- Ravikumar, B. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nature. 36, 585-595 (2004).
- Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).
