एक ड्रोसोफिला Ommatidium विच्छेदन और इमेजिंग
Summary
वयस्क के उपयोग में सीमित कारक<em> ड्रोसोफिला</em> Neurodegeneration और कोशिका जीव विज्ञान का अध्ययन आँख intracellular प्रक्रियाओं की मुश्किल इमेजिंग है. हम एकल ommatidia के विच्छेदन के लिए एक वास्तविक फाइड प्राथमिक neuronal सेल संस्कृति, जो नशीली दवाओं के उपचार और उन्नत इमेजिंग अधीन किया जा सकता है उत्पन्न का वर्णन.
Abstract
फल मक्खी ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के लिए अमूल्य योगदान दिया है और अपने शक्तिशाली एक आनुवंशिकी के कारण neurodegenerative रोगों के लिए एक मॉडल के रूप में व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया है. विशेष में उड़ आँख neurodegeneration अनुसंधान के लिए पसंद की अंग किया गया है, ड्रोसोफिला तंत्रिका प्रणाली के सबसे सुलभ और जीवन नगण्य हिस्सा जा रहा है . कठिनाई हालांकि बरकरार आँखों के प्रमुख चेतावनी है, क्योंकि वर्णक के तीव्र autofluorescence इमेजिंग भोजी गतिशीलता 2 के रूप में में intracellular घटनाओं, जो neurodegeneration के समझने के लिए सर्वोपरि हैं .
हमने हाल ही में विच्छेदन और एकल ommatidia 3 की संस्कृति है कि autophagic dysfunctions के हमारी समझ के लिए आवश्यक Dentatorubro – Pallidoluysian शोष के एक मक्खी मॉडल (DRPLA) 3, 4 में किया गया है का इस्तेमाल किया है.
अब हम इस तकनीक का व्यापक वर्णन (1 छवि), electrophysiological 5 अध्ययन है, जो नाटकीय रूप से neurodegeneration मॉडल के लिए उड़ान भरने की संभावना का विस्तार होने की संभावना है से अनुकूलित रिपोर्ट. इस विधि छवि subcellular घटनाओं रहते हैं और फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं पर प्रभावी दवा प्रशासन की निगरानी (छवि 2) के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. यदि मोज़ेक 6-8 तकनीकों के साथ संयोजन में उपयोग किया जाता है, आनुवंशिक रूप से विभिन्न कक्षों की प्रतिक्रियाओं समानांतर में assayed किया जा सकता है (छवि 2).
Protocol
Discussion
एकल ommatidium यहाँ प्रस्तुत विच्छेदन neurodegeneration जैसे प्रक्रियाओं, जब ड्रोसोफिला आँख में मॉडलिंग के बारे में गहरी सेल जैविक जानकारी के संग्रह के लिए सक्षम बनाता है. फोटोरिसेप्टर न्यूरॉन्स अधिक आसानी से अन्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम विचार विमर्श के लिए बर्नार्ड Charroux धन्यवाद. इस काम KCL बायोमेडिकल स्कूल द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
References
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