Windowing hönsägg för utvecklingsstudier

Summary

Den enkla tillgänglighet embryot har gjort för experiment för att kartlägga cell öden med hjälp av flera metoder, bland annat brud vaktel chimärer och fokala färg märkning. I denna artikel visar vi en metod ägg beredningen som har optimerats för lång överlevnadstid.

Abstract

Studien av utvecklingen har varit mycket hjälp av användningen av kycklingembryo som en experimentell modell. Den enkla tillgänglighet embryot har gjort för experiment för att kartlägga cell öden med hjälp av flera metoder, bland annat brud vaktel chimärer och fokala färg märkning. Dessutom möjliggör det molekylära störningar av flera slag, inklusive placering av protein-belagda pärlor och införande av plasmid DNA med i ovo elektroporation. Dessa experiment har givit viktiga data om utvecklingen av det centrala och perifera nervsystemet. För många av dessa studier är det nödvändigt att öppna äggskal och återförsluta utan störande embryots tillväxt. Embryot kan undersökas vid på varandra följande utvecklingsstadier genom att återuppta äggskal. Medan det finns flera utmärkta metoder för att öppna hönsägg, i denna artikel visar vi en metod som har optimerats för lång överlevnadstid. I denna metod vilar ägget på sin sida och ett litet fönster skärs i skalet. Efter den experimentella procedur, är skalet används för att täcka ägget under hela dess utveckling. Klart plasttejp överliggande det äggskal skyddar embryot och hjälper till att behålla fukt under resten av inkubationstiden. Denna metod har använts med början vid två dagars inkubation och har gjort det möjligt överlevnad genom mogna embryonala åldrar.

Protocol

1. Ta bort ägg från inkubatorn Behåll vid 37 ° C och en relativ luftfuktighet som över 60%. Ta bort äggen, slå ägg 90 ° så att den stora basen ligger horisontellt. 2. Pinnen ägg att sterilisera Mätta en bunt icke-steril kompress med 70% etanol. Använd två till tre bitar att svabba upp till 5 ägg. Kassera när gasväv är smutsig. 3. Förbereda äggvita borttagning webbplats Klipp ut och …

Discussion

Denna metod gör det möjligt för långa överlevnadstid efter experimentella manipulationer. Till exempel tillåts dye-märkning studier överlevnad till E10 eller senare i en öde kartläggning (1). Dessutom har den använts i ovo elektroporering studier som ger förändringen av nivåerna genuttryck och krävs utveckling för att gå till senare utvecklingsstadier (2-6). Detta fönstersystem Tekniken kan användas i kombination med ett förfarande som kräver överlevnad efter manipulationer för att embryot.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Rotating incubator		Profi		Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60%
70 % EtOH
gauze
3M plastic tape
10cc syringe				1/egg
18G needles				1½ inch needle, 1/syringe
Dissection scissors				4″ sharp straight blades
Fertilized Eggs

.