Canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de Wharton

Summary

Un protocole pour la canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton est décrite. Pour cette expérience, la solution de bleu trypan est utilisé comme un teinturier de démontrer comment cette technique délivre effectivement des perfusions dans la glande cible, et de suggérer la fiabilité de cette nouvelle approche comme un potentiel clinique des médicaments / thérapie cellulaire pour la régénération des glandes salivaires.

Abstract

Sévère hypofonction des glandes salivaires est fréquemment retrouvée chez les patients atteints du syndrome de Gougerot-Sjögren et ceux qui recevoir une irradiation thérapeutique dans leur tête et du cou pour le traitement du cancer. Les deux groupes de patients éprouvent des symptômes tels que la xérostomie (bouche sèche), dysphagie (mastication et de la déglutition altérée), caries dentaires graves, altération du goût, des infections oro-pharyngées (candidose), inflammation des muqueuses, des douleurs et de l'inconfort.

Une approche novatrice de la médecine régénérative pour le traitement de la glande salivaire hypo-fonction est spéculé RS Redman, E Mezey et al, 2009:. Cellules souches peuvent être déposés directement par canulation dans la glande comme une méthode efficace pour relancer les fonctions de l'altération organe. On peut supposer que les cellules souches ont migré étrangers se différencier en cellules glandulaires à fonctionner dans le cadre de la glande salivaire hôte. En outre, cette technique de canulation est une méthode de livraison rapide et efficace pour les essais cliniquesdemande de transfert de gène.

Ici, nous illustrons les étapes à suivre pour effectuer la procédure de cathétérisme de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton (figure 1). C3H souris (Charles River, Montréal, QC, Canada) sont utilisés pour cette expérience, qui ont été gardés sous des conditions conventionnelles propres au centre de l'Université McGill ressources animales. Toutes les expériences ont été approuvés par le Comité de protection des animaux et de l'Université étaient en conformité avec les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux.

Pour cette expérience, un bleu trypan solution est perfusée dans la glande à travers l'ouverture de la gaine de Wharton en utilisant une seringue à insuline avec une aiguille de calibre 29-enfermé à l'intérieur d'un tube de polyéthylène. Par la suite, la souris est disséqué pour montrer que les perfusions migré dans la glande succès.

Protocol

1. Description du procédurale Voie sous-cutanée injecter 1 poids corporel ul / g de 0,5 mg / ml monohydrate de sulfate d'atropine (Cat # 11330, Fluka, USA) dans chaque souris pour empêcher les sécrétions salivaires de perturber le mouvement des perfusions. Anesthésier chaque souris avec 1 poids corporel ul / g de 100 mg / ml de kétamine et 20 mg / ml de xylazine (Phoenix scientifique, AR, USA) solution injecté par voie intra-péritonéale (IP) Placez l…

Discussion

Une difficulté avec cette méthode canulation est d'empêcher le reflux de la solution injectée. Même si la solution de bleu trypan a temporairement migré dans la glande salivaire succès, la sécrétion de salive pourrait interférer avec les perfusions et provoquer le reflux de la solution de bleu trypan hors de la glande. Par mesure de précaution, en plus d'utiliser l'atropine pour inhiber la sécrétion de la salive, la canule polyéthylène doit rester dans le conduit de Wharton et le piston de la …

Materials

Name of the reagent	Type	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250