Antimikrobiell resistensbestämning av Mycobacterium tuberculosis är utmanande men avgörande för patientens vård. Detta mikrotiterplatta formatet erbjuder test av 12 mykobakterier droger och ger minsta hämmande koncentration (MIC) värden, som kommer stöd i lämplig behandling.
Den snabba detektion av antibiotikaresistens är viktigt i arbetet med att kontrollera ökningen av resistenta Mycobacterium tuberculosis (MTB). Antimikrobiella resistensbestämning (AST) i MTB har traditionellt utförts av agar metoden för proportioner eller genom macrobroth tester på ett instrument som Bactec (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Diagnostik, Cleveland, OH) eller BACT / ALERT (bioMérieux, Hazelwood, MO). Den agar Andelen metod, medan vara den "gyllene" standard AST, är arbetskraftsintensiv och kräver beräkning av motstånd genom att utföra kolonier på läkemedel som innehåller agar jämfört med drogfria agar. Om det finns ≥ 1% tillväxt på drogen innehåller medelhög jämfört med drogfria medium är organismen anses resistenta mot detta läkemedel. Den macrobroth metoder kräver instrumentering och testa brytpunkt ("kritisk") av läkemedlet för den första raden läkemedel (isoniazid, etambutol, rifampicin och pyrazinamid). Metoden som beskrivs här är kommersiellt tillgänglig i ett 96 väl mikrotiterplattan format [MYCOTB (TREK Diagnostics)] och innehåller ökande koncentrationer av 12 antibiotika används för behandling av tuberkulos både första (isoniazid, rifampicin, etambutol) och andra droger linje (amikacin, Cycloserine, ethionamide, kanamycin, moxifloxacin, ofloxacin, para-aminosalicylsyra, rifabutin och streptomycin). Pyrazinamid, är ett första raden drog, ingår inte i mikrotiterplatta på grund av sitt behov av sura testförhållanden. Fördelar med mikroteststrips systemet inkluderar både enkelt installera och snabbare vända tid (14 dagar) jämfört med traditionella agar andel (21 dagar). Dessutom kan plåten sättas upp från inokulat beredd antingen buljong eller fast medium. Eftersom mikrotiterplatta formatet är nytt och sedan MTB presenterar unik säkerhet utmaningar i laboratoriet, kommer detta protokoll beskriver hur säkert att installera, inkubera och läsa mikrotiterplattan.
Ett exempel på en AST mikrotiterplatta som har positiv tillväxt kontroller visas i figur 1 och slutpunkten MIC (mikrogram / ml) för varje läkemedel är inringat. En studie utförd i vårt laboratorium visade att AST mikrotiterplatta metod är likvärdig med den gyllene standarden agar andel metod för resistensbestämning av Mycobacterium tuberculosis. Snabbare rapportering av resultat som erhölls med mikroteststrips AST mikrotiterplatta jämfört med traditionella agar andelen metoden med den slutliga tolkningen för AST mikrotiterplatta och agar andel metoden vid 14 och 21 dagar, har respectively.The AST mikrotiterplatta fördelen att testa först och andra raden läkemedel samtidigt som kan bidra till att förhindra överdrivna förseningar med resistenta stammar. AST mikrotiterplattan är också mycket lättare att ställa in och läsa än APM och både en manuell spegel och en semi-automatiserat system som Vizion kan användas för att läsa skyltar. Tillgången till ett MIC-värde för tbc-resistens testning kan ge värdefull ny information till läkare i förhållande till den traditionella kritiska koncentrationen värde, särskilt för dem isolat med "gränsfall" känslighet.
The authors have nothing to disclose.
Vi vill tacka laboratoriet tekniker från Mayo Clinic mykobakteriologin Laboratoriet för deras hjälp under studien.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |