संज्ञानात्मक कपाल रेडियोथेरेपी की वजह से decrements बढ़ाता

Summary

संज्ञानात्मक मस्तिष्क ट्यूमर के क्ष – रश्मिचिकित्सकीय प्रबंधन से उत्पन्न हानि एक चिकित्सकीय असभ्य शर्त है कि जीवन की गुणवत्ता पर प्रतिकूल प्रभावों का प्रतिनिधित्व करता है. गंभीर विकिरण प्रेरित संज्ञानात्मक decrements ameliorating के लिए संभावित उपायों का मूल्यांकन करने की क्षमता अंततः अनुभूति की कठोर मात्रात्मक आकलन करने की क्षमता पर निर्भर करता है.

Abstract

With the exception of survival, cognitive impairment stemming from the clinical management of cancer is a major factor dictating therapeutic outcome. For many patients afflicted with CNS and non-CNS malignancies, radiotherapy and chemotherapy offer the best options for disease control. These treatments however come at a cost, and nearly all cancer survivors (~11 million in the US alone as of 2006) incur some risk for developing cognitive dysfunction, with the most severe cases found in patients subjected to cranial radiotherapy (~200,000/yr) for the control of primary and metastatic brain tumors¹. Particularly problematic are pediatric cases, whose long-term survival plagued with marked cognitive decrements results in significant socioeconomic burdens². To date, there are still no satisfactory solutions to this significant clinical problem.

We have addressed this serious health concern using transplanted stem cells to combat radiation-induced cognitive decline in athymic rats subjected to cranial irradiation³. Details of the stereotaxic irradiation and the in vitro culturing and transplantation of human neural stem cells (hNSCs) can be found in our companion paper (Acharya et al., JoVE reference). Following irradiation and transplantation surgery, rats are then assessed for changes in cognition, grafted cell survival and expression of differentiation-specific markers 1 and 4-months after irradiation. To critically evaluate the success or failure of any potential intervention designed to ameliorate radiation-induced cognitive sequelae, a rigorous series of quantitative cognitive tasks must be performed. To accomplish this, we subject our animals to a suite of cognitive testing paradigms including novel place recognition, water maze, elevated plus maze and fear conditioning, in order to quantify hippocampal and non-hippocampal learning and memory. We have demonstrated the utility of these tests for quantifying specific types of cognitive decrements in irradiated animals, and used them to show that animals engrafted with hNSCs exhibit significant improvements in cognitive function³.

The cognitive benefits derived from engrafted human stem cells suggest that similar strategies may one day provide much needed clinical recourse to cancer survivors suffering from impaired cognition. Accordingly, we have provided written and visual documentation of the critical steps used in our cognitive testing paradigms to facilitate the translation of our promising results into the clinic.

Protocol

हमारे संज्ञानात्मक परीक्षण मानदंड schematically चित्र 1 में diagrammed कर रहे हैं. संज्ञानात्मक परीक्षण एक महीने के बाद शुरू की है विकिरण और शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं का प्रदर्शन कर रहे हैं. उपन्यास प्लेस मान्यता टास्क (NPR) का आयोजन उपन्यास प्लेस मान्यता कार्य (NPR) Mumby और उनके सहयोगियों ने (2002) में वर्णित प्रक्रियाओं पर आधारित है, और एक स्थानिक मान्यता स्मृति कार्य है कि 4 हिप्पोकैम्पस पर निर्भर करता है. चूहों पहले उन्हें परीक्षण Arenas में रखकर (कस्टम बनाया, सफेद, एक्रिलिक, खुले टॉप बॉक्स, 70cm एक्स 70cm एक्स 40cm उच्च) एक बार 20 मिनट के लिए तीन दिनों के लिए प्रति दिन परीक्षण के संदर्भ के साथ familiarized कर रहे हैं. वस्तुओं है कि बाद में परीक्षण के लिए इस्तेमाल नहीं किया जाएगा Arenas में इन habituation सत्र के दौरान रखा जाता है. Habituation चरण खोजपूर्ण व्यवहार के मैनुअल टिप्पणियों, ध्यान दिया जाना चाहिए चाहिए, जबकि रिकॉर्डिंग और व्यवहार की ट्रैकिंग के लिए आवश्यक नहीं कर रहे हैं. , Arenas NPR कार्य के सभी चरणों के लिए 70% इथेनॉल का उपयोग करने में confounding गंध cues को कम पशुओं के बीच अच्छी तरह से साफ कर रहे हैं. सभी परीक्षणों के लिए, experimenters एक सुसंगत अभिविन्यास में परीक्षण एरेनास के केंद्र में जगह जानवरों के लिए मौका है कि जानवरों बस कि वे ब्लॉक के बगल में रखा हो होने का पता लगाने के कम से कम करने के लिए. परिचय चरण और 5 मिनट के परीक्षण चरण के चौथे दिन पर प्रशासित रहे हैं. परिचय चरण के लिए दो समान प्लास्टिक (8cm उच्च एक्स 3cm 10cm एक्स) ब्लॉक है कि अच्छी तरह से किया गया है 70% इथेनॉल के साथ साफ परीक्षण एरेनास भीतर विशिष्ट पदों पर रखा जाता है. एक जानवर प्रत्येक क्षेत्र में 5 मिनट के लिए रखा जाता है और स्वतंत्र रूप से लगाने की अनुमति दी. दो समान रूप से परिचित स्थानिक पदों के अन्वेषण स्वचालित ट्रैकिंग प्रणाली का उपयोग रन बनाए है. सभी चरणों के लिए, अन्वेषण, एक जानवर की नाक बिंदु की एक 4cm त्रिज्या के भीतर किया जा रहा है और ब्लॉकों की ओर निर्देशित के रूप में परिभाषित किया गया है. के लिएपरिचय चरण llowing, पशुओं के लिए एक छोटे होल्डिंग पिंजरे में एक देरी 5 मिनट के अंतराल के लिए रखा जाता है. इस समय के दौरान, परीक्षण एरेनास 70% इथेनॉल के साथ साफ कर रहे हैं, और ब्लॉक के समान प्रतियां जोड़ रहे हैं, के रूप में परिचय चरण के दौरान एक समान भौगोलिक स्थिति में, एक और एक एक उपन्यास भौगोलिक स्थिति में है. यदि एक चूहा परिचय चरण से ब्लॉक के स्थानिक व्यवस्था याद है, यह अधिक समय खर्च उपन्यास स्थानिक स्थान में स्थित ब्लॉक की खोज की जाएगी. देरी 5 मिनट के अंतराल के बाद, जानवरों परीक्षण 5 मिनट चरण के लिए परीक्षण एरेनास के लिए लौट रहे हैं. वे 3 मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से पता लगाने के. परिचय चरण की समाप्ति के बाद 24 घंटे, जानवरों परीक्षण एरेनास के लिए लौट रहे हैं फिर से परीक्षण 24 घंटे चरण के लिए. इस चरण के लिए एक ब्लॉक के रूप में परिचय और 5 मिनट के परीक्षण चरणों के दौरान एक ही स्थिति में रहता है, और अन्य ब्लॉक एक नया, उपन्यास स्थानिक स्थिति में रखा जाता है. फिर अगर, एक चूहे फिरसदस्य पहले दिन चरण परिचय से ब्लॉक के स्थानिक व्यवस्था है, वह और अधिक समय बिताने उपन्यास स्थानिक स्थान में स्थित ब्लॉक की खोज करेंगे. अब, समय की राशि विभिन्न स्थानिक स्थिति में ब्लॉक की खोज बिताया स्वचालित ट्रैकिंग प्रोग्राम का उपयोग कर एकत्र किया जाता है, और प्रयोगात्मक समूहों के बीच मतभेद के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण किया जा सकता है. परिचय चरण के लिए कुल समय पूरे परीक्षण भर में दोनों स्थानिक स्थानों की खोज खर्च की गणना की जाती है. इस चरण के दौरान दो स्थानिक स्थानों की खोज के खर्च के रूप में वे समान रूप से परिचित / जानवरों के लिए अपरिचित (2A छवि) में कोई अंतर नहीं होना चाहिए. प्रयोगात्मक समूहों के बीच कुल अन्वेषण में इसके अलावा, महत्वपूर्ण मतभेद प्रेरणा में समूह रूपों का पता लगाने के या चिंता के स्तर का संकेत है और हो सकता है जब दो परीक्षण चरणों से स्थानिक मान्यता स्मृति परिणामों की व्याख्या पर विचार किया जाना चाहिए. दोनों के लिए5 मिनट और 24 घंटे परीक्षण चरणों, अन्वेषण अनुपात की गणना निम्न प्रकार है: समय उपन्यास स्थिति तलाश खर्च समय खर्च परिचित स्थिति / कुल की खोज खर्च (छवि 2B) की खोज. इस तरह, के लिए वस्तुओं का पता लगाने के लिए प्रेरणा में व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता खाते में ले लिया है. सामान्य जानवरों के काफी अधिक समय बिताने के उपन्यास भौगोलिक स्थिति से 5 मिनट और 24 घंटे की देरी अंतराल (छवि 2B) का पालन करने का मौका (धराशायी लाइन द्वारा इंगित) उम्मीद की खोज. अन्वेषण अनुपात आम तौर पर 5 मिनट और 24 घंटे 4 परीक्षण के पहले 60 सेकंड के लिए गणना की है. इस वजह से, परीक्षण परीक्षण प्रगति के रूप में, उपन्यास भौगोलिक स्थिति अधिक पशुओं के लिए परिचित हो जाता है. इस प्रकार, परीक्षण परीक्षण के पहले मिनट स्थानिक मान्यता स्मृति की सबसे सही आकलन प्रदान करता है. 2. ऊंचा प्लस भूलभुलैया टास्क (EPM) का आयोजन बुलंदप्लस भूलभुलैया कार्य (EPM) Walf और फ्रे, 5 2007 से प्रक्रियाओं पर आधारित है. EPM कार्य कृन्तकों में चिंता का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. EPM तंत्र एक 4 हाथ (45 "x 4") भूलभुलैया 45 उठाया "मंजिल स्तर से एक से अधिक आकार में व्यवस्थित हथियारों के साथ दो हथियार संलग्न हैं और दो खुले हैं दिखाया तंत्र मेड एसोसिएट्स इंक द्वारा निर्मित है. . इस कार्य के दौरान व्यवहार चूहा प्राकृतिक उपन्यास (खुली बाहों में बिताए समय) वातावरण और संरक्षित क्षेत्रों (बंद हथियार) में शेष के लिए वरीयता का पता लगाने के लिए प्रेरणा के बीच एक संघर्ष को दर्शाता है. प्रयोगात्मक कमरे चमकीले भूलभुलैया में बताया spotlights साथ जलाया जाता है करने के लिए पर्याप्त प्रेरणा को सुनिश्चित करने के लिए बंद, अधिक dimly जलाया हथियार पसंद. भूलभुलैया अच्छी तरह से साफ किया जाता है पहले 1 पशु परीक्षण किया है, और प्रत्येक परीक्षण के बीच. जानवर तंत्र में यह forelimbs तहत पकड़े और भूलभुलैया के मध्य भाग में रखकर, खुले हाथ है कि से दूर है का सामना करना पड़ द्वारा रखा जाता हैexperimenter. प्रत्येक परीक्षण के 5 मिनट के लिए रहता है. जानवर के पथ स्वचालित ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग कर तो खुले और बंद बाहों में प्रविष्टियों की संख्या और समय की राशि खर्च की गणना कर सकते हैं लगाया है. तंत्र के किनारे पर पालन, सौंदर्य, और सिर dips के रूप में अतिरिक्त व्यवहार पर नजर रखी जा सकता है. जब जानवर के केंद्र बिंदु के एक हाथ में पार एक प्रविष्टि में गिना जाता है. यदि एक चूहे भूलभुलैया गिर जाता है, इसे जल्दी से खुले हाथ से जो यह गिर गया पर वापस रख दिया गया है, और घटना अवलोकन नोटबुक में दर्ज की गई है. यदि एक चूहा समय की एक विस्तारित अवधि के लिए जमा देता है, किसी भी संभव का कारण बनता है (उदाहरण के अचानक, परीक्षण के कमरे के बाहर जोर शोर) विख्यात हैं, और परीक्षण के साथ व्यवहार, तो जारी है कि सभी प्रायोगिक पशुओं के समान जोखिम बार है. खुला बनाम बंद बाहों में बिताए समय के अनुपात की गणना करने के लिए प्रयोग किया जाता है: खुली बाहों / बाहों में कुल समय में समय है. इसी तरह, प्रविष्टियों का अनुपात कुल बनाम हथियार खोलने के लिएहाथ प्रविष्टियों की गणना की जाती है. स्वचालित ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग, कुल दूरी कूच और वेग क्रम में प्रयोगात्मक समूहों के बीच मोटर समारोह में किसी भी मतभेद का आकलन भी मापा जा सकता है. कमी चिंता खुली बाहों में बिताए समय का एक बड़ा अनुपात के साथ जुड़ा हुआ है, जबकि वृद्धि की चिंता और भय अधिक बंद बाहों में खर्च समय के साथ जुड़े रहे हैं. सामान्य जानवरों खुली बाहों में मौका (धराशायी लाइन ने संकेत दिया, अंजीर 3) से अपेक्षा से काफी कम समय खर्च करते हैं. अधिक उत्सुक जानवर खुली बाहों में अनुपात में कम समय खर्च करते हैं, जबकि कम चिंतित जानवरों खुली बाहों (उदाहरण के लिए, भूलभुलैया या निम्नलिखित anxiolytic दवा उपचार के लिए कई जोखिम के बाद) में अधिक समय बिताना होगा. 3. प्रासंगिक और cued डर कंडीशनिंग टास्क (एफसी) का आयोजन प्रासंगिक और cued डर कंडीशनिंग (एफसी) के कार्य विवरण Schaf से प्रक्रियाओं पर आधारित हैंई एट अल., 1999, Winocur एट अल, 2006 और MacLeod एट अल., 6-8 2007. द्वारा यह हानिकारक प्रेरणा (आमतौर पर एक हल्के footshock साथ बाँधना, डर कंडीशनिंग कार्य (एफसी) एक व्यवहार प्रतिमान जो जानवरों के लिए एक पहले से तटस्थ प्रोत्साहन (वातानुकूलित उत्तेजना एक संदर्भ, एक प्रकाश या एक स्वर), डर जानने के लिए असुविधाजनक प्रोत्साहन ). लर्निंग तेजी से, मजबूत और लंबे समय से स्थायी है, और इस प्रकार एफसी कार्य अक्सर कृन्तकों में सीखने और स्मृति के neurobiological circuitry का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एफसी तंत्र एक 30cm एक्स 30cm एक्स 40cm उच्च संलग्न चैम्बर (Phenotyper, 3000 मॉडल, Noldus सूचना प्रौद्योगिकी). कक्ष के फर्श जो सदमा प्रोत्साहन देने के लिए प्रयोग किया जाता है एक स्टेनलेस स्टील ग्रिड के होते हैं. Phenotyper एक वक्ता कि एक 2300Hz, मांग पर 90dB टोन का उत्सर्जन करता है, वातानुकूलित प्रोत्साहन के रूप में अभिनय के साथ सुसज्जित है. सदमे एक सदमे जनरेटर (मेड एसोसिएट्स इंक) के माध्यम से दिया है. सदमे एक क्षणिक बेचैनी है जो कोई लास उत्पादनting दर्द या ऊतकों को नुकसान. दोनों प्रशिक्षण और परीक्षण परीक्षण के लिए, सदमे और टोन उत्तेजनाओं की डिलीवरी समय है और स्वतः नियंत्रित Ethovision XT का उपयोग जोड़ने पर परीक्षण और हार्डवेयर नियंत्रण मॉड्यूल (7.0 संस्करण, Noldus सूचना प्रौद्योगिकी). 1 दिन, एफसी प्रशिक्षण आयोजित किया जाता है. Phenotyper 70% इथेनॉल के साथ अच्छी तरह से साफ किया जाता है, और एक एकल जानवर कक्ष में रखा गया है. प्रशिक्षण परीक्षण तीन चरणों के होते हैं, (1) एक आधारभूत चरण में है, जब कोई सदमे या टोन प्रशासित किया जाता है, (2) एक प्रशिक्षण चरण जब टोन सदमे pairings प्रस्तुत कर रहे हैं, और (3) एक चरण के बाद प्रशिक्षण, कोई जब सदमे या टोन दिलाई है. प्रत्येक चरण में पशु प्रति 15 मिनट के एक कुल प्रशिक्षण परीक्षण समय के लिए लगभग 5 मिनट तक रहता है. प्रशिक्षण चरण के दौरान, टोन 30 सेकंड और स्वर के अंत के साथ संयोग के लिए किया जाता है, एक 1mA झटका 1 2 के लिए ग्रिड को दिया जाता है. यह टोन सदमे बाँधना 5 बार के एक कुल दोहराया है एक चर seco के साथ 10 से 60,एन डी प्रत्येक बाँधना के बीच अंतराल रिक्ति. प्रशिक्षण चरण से, प्रत्येक जानवर समय की प्रतिशत स्थिर, या ठंड खर्च करता है, प्रारंभिक आधारभूत चरण (टोन झटका pairings पहले सहज ठंड स्थापित) के अंतिम 60 सेकंड से और पोस्ट के अंतिम 60 सेकंड से मापा जाता है प्रशिक्षण चरण (टोन सदमे pairings के जवाब में ठंड व्यवहार को स्थापित करने के लिए). सामान्य जानवरों आधारभूत और चरण के बाद प्रशिक्षण (4 छवि) के दौरान बहुत (~ 95%) उच्च ठंड के स्तर चरण के दौरान ठंड का स्तर बहुत कम प्रदर्शित करते हैं. 24 घंटे बाद ही, पशु के समान संदर्भ के लिए वापस आ रहा है और 5 मिनट प्रासंगिक एफसी परीक्षण के लिए मनाया. सदमे या टोन इस चरण के दौरान दिया जाता है, और समय बिताया ठंड का प्रतिशत पूरे परीक्षण के लिए गणना की है. संदर्भ में प्रशिक्षण के संदर्भ से परीक्षण करने के लिए निरंतर रखने के महत्व को ध्यान दें. वास्तव में, एक ही प्रयोगकर्ता को संभालने और दोनों दिन पर पशुओं का परीक्षण है पूर्वोत्तरcessary. सामान्य जानवरों संदर्भ ठंड व्यवहार (4 छवि) में लगे परीक्षण का लगभग 70% खर्च करते हैं. cued एफसी परीक्षण के एक घंटे के बाद किया जाता है. चैम्बर के संदर्भ ग्रिड मंजिल को हटाने, चैम्बर के बाहर करने के लिए पैनल को जोड़ने, और एक सुगंधित घर क्लीनर के साथ फर्श की सफाई से बदल रहा है. पशु ठंड व्यवहार 1 मिनट के लिए मनाया जाता है, और ठंड का स्तर बहुत कम कर रहे हैं अगर संदर्भ पर्याप्त बदल दिया गया है (4 छवि). टोन तो 3 मिनट के लिए खेला जाता है, चुप्पी की एक अंतिम मिनट के द्वारा पीछा किया, और प्रतिशत समय बिताया ठंड की गणना है. सामान्य जानवरों के इस समय (4 छवि) के दौरान ठंड के उच्च स्तर को दिखाते हैं. कुल में, ठंड व्यवहार के 5 असतत उपायों एकत्र कर रहे हैं, (1) आधारभूत, (2) के बाद प्रशिक्षण, संदर्भ परीक्षण (3), (4) पूर्व क्यू परीक्षण, (5) क्यू और क्यू के बाद परीक्षण. ठंड के आधारभूत चरण के दौरान अनुपस्थिति सामान्य चिंता का स्तर स्थापित करता है, जबकि substanचरण के बाद प्रशिक्षण के दौरान tial ठंड बरकरार संवेदी मोटर क्षमता का पता चलता है. संदर्भ परीक्षण के दौरान ठंड प्रशिक्षण संदर्भ है, जो बरकरार hippocampal और amygdala 9 समारोह पर निर्भर करता है के लिए 24 घंटे स्मृति स्थापित करता है. पूर्व क्यू परीक्षण ठंड की कमी के प्रारंभिक प्रशिक्षण के संदर्भ के लिए पर्याप्त परिवर्तन का पता चलता है. क्यू और पोस्ट क्यू ठंड टोन प्रोत्साहन, जो बरकरार प्रमस्तिष्कखंड 9 समारोह पर निर्भर करता है के लिए 24 घंटे स्मृति स्थापित करता है. 4. मॉरिस पानी भूलभुलैया काम (MWM) का आयोजन मॉरिस पानी भूलभुलैया कार्य प्रक्रियाओं पिछले 10,11 वर्णन पर आधारित हैं. मॉरिस पानी भूलभुलैया काम (MWM) कृन्तकों कि डिस्टल cues के उपयोग अपारदर्शी पानी का एक बड़ा पूल में एक जलमग्न भागने मंच का पता लगाने की आवश्यकता के लिए स्थानिक सीखने का एक परीक्षण है. बड़े, अलग दृश्य cues विशिष्ट, लगातार स्थानों में पूल के चारों ओर रखा जाता है. पशु इन संकेतों का उपयोग सु को नेविगेट करना सीखोमंच bmerged. पशु की निगरानी कर रहे हैं और पानी से निकाल कर अगर वे करने के लिए तैरने करने में असमर्थ हैं. स्थानिक सीखने दोहराया परीक्षण भर में मूल्यांकन किया है और संदर्भ स्मृति मंच क्षेत्र के लिए वरीयता का आकलन जब मंच अनुपस्थित है द्वारा निर्धारित किया जाता है. उलटा परीक्षण स्थानिक impairments के पता लगाने में वृद्धि, और ललाट प्रांतस्था के रूप में 10 में अतिरिक्त मस्तिष्क क्षेत्रों कर सकते हैं. MWM कार्य 8 दिनों में प्रशासित किया जाता है और 4 चरणों के होते हैं, एक cued परीक्षण, एक अधिग्रहण चरण, एक 24 घंटे जांच परीक्षण और एक उत्क्रमण सीखने परीक्षण. पूल एक कस्टम निर्मित सफेद, polyethylene टैंक, 200cm व्यास में और 60 से अधिक है. यह पानी के साथ लगभग 30cm गहरी से भरा है और सफेद, गैर विषैले रंग के साथ अपारदर्शी बनाया. पानी का तापमान 20 और 22 डिग्री सेल्सियस (68 और 72 ° एफ) के बीच बनाए रखा है. भागने मंच एक कस्टम निर्मित, एक परिपत्र व्यास में शीर्ष मापने 10cm के साथ स्पष्ट प्लास्टिक खड़े है. यह wate के सतह के नीचे लगभग 1.5cm बैठताआर. cued परीक्षण 4 1 दिन प्रशासित परीक्षणों के होते हैं. इन परीक्षणों के लिए एक अलग काले और सफेद झंडा मंच के बीच में रखा जाता है इतना है कि भागने स्थान जानवरों के लिए स्पष्ट है. स्थानिक सूचना के इस चरण के दौरान उपयोग कम से कम करने के लिए, दीवार cues हटा रहे हैं और मंच और शुरू स्थानों परीक्षण से परीक्षण करने के लिए अलग कर रहे हैं. इस चरण में मदद करता है बाहर प्रयोगात्मक समूहों के बीच कोई मतभेद संवेदी मोटर से संबंधित शासन अधिग्रहण चरण शुरू होने से पहले. MWM कार्य के सभी चरणों के लिए, जानवरों forelimbs के तहत आयोजित की जाती हैं और धीरे नामित शुरू करने की स्थिति में पानी में रखा जाता है, पूल की दीवार का सामना करना पड़ रहा है. पशु 8 ऐसी है कि वहाँ एक 8 से 10 मिनट 4 दैनिक परीक्षणों के प्रत्येक के बीच अंतर – परीक्षण अंतराल है के साथियों में परीक्षण कर रहे हैं. अंतर – परीक्षण के अंतराल के दौरान, जानवरों वार्मिंग पिंजरों में रखा जाता है हाइपोथर्मिया से बचने के लिए. Cued परीक्षण के लिए 30 सेकंड का एक अधिकतम तैरने समय पशुओं के लिए अनुमति दी है पर चढ़ाईमंच. यदि अधिकतम समय जानवरों के पलायन से पहले तक पहुँच जाता है, उसे experimenter हाथ से मंच और गाइड यह मंच पर देता है. पशु 20 सेकंड पहले एक वार्मिंग पिंजरे में रखा जा रहा है बाकी अवधि के लिए मंच पर बनी हुई है. प्रत्येक cued परीक्षण परीक्षण के लिए पशु पूल की परिधि में एक अलग, पूर्व निर्धारित स्थान से शुरू शुरू कर दिया है, और मंच भी 4 अलग वृत्त का चतुर्थ भाग पदों के प्रत्येक के लिए ले जाया जाता है. अधिग्रहण चरण अगले दिन शुरू होता है और लगातार 5 दिनों के लिए प्रति दिन 4 परीक्षणों के होते हैं. इस चरण के दौरान, छिपा मंच एक ही स्थान में रहता है और जानवरों के लिए यह नेविगेट करने डिस्टल कमरे cues का उपयोग करना सीखो. फिर, 4 परीक्षणों में से प्रत्येक के लिए, जानवर पूल में एक अलग, पूर्व निर्धारित शुरू बिंदु पर रखा गया है. हर दिन, दो शुरू अंक के बाईं करने के लिए कर रहे हैं और दो शुरू अंक के मंच के सही करने के लिए कर रहे हैं, यादृच्छिक क्रम में egoc के विकास से बचनेentric स्थानिक कार्य को हल करने के लिए रणनीतियों. प्रत्येक अधिग्रहण परीक्षण के लिए अधिकतम तैरने समय 60 सेकंड है, जिसके बाद जानवर के लिए निर्देशित है और प्रयोगकर्ता द्वारा मंच पर रखा. पशु 20 सेकंड के लिए भागने के बाद मंच पर बनी हुई है. 7 दिन, 24 घंटे में अंतिम प्रशिक्षण परीक्षण के बाद, एक जांच 60 दूसरा परीक्षण प्रशासित किया जाता है, जो मंच में निकाल दिया जाता है. इस चरण वृत्त का चतुर्थ भाग है कि मंच होते हैं और स्थानिक संदर्भ 10 स्मृति का एक उपाय के रूप में प्रयोग किया जाता है के लिए जानवर वरीयता निर्धारित करता है. जांच परीक्षण के बाद, मंच एक ही वृत्त का चतुर्थ भाग वापस आ रहा है और 3 नियमित अधिग्रहण परीक्षणों प्रशासित रहे हैं. 8 दिन उत्क्रमण सीखने के परीक्षण के लिए, मंच एक नए स्थान पर ले जाया जाता है क्रम में उत्क्रमण सीखने की क्षमता का आकलन करने के लिए. मापने समय जानवरों की राशि अपने नए स्थान की तुलना में अपने पिछले स्थान में मंच के लिए खोज खर्च perseveration, या आई एन ए के एक आकलन प्रदान करता हैमंच एक बार पिछले स्थान पर जवाब देने को दबाने के लिए साख 10 ले जाया गया है. अधिग्रहण और जांच चरणों के लिए, 4 60 2 परीक्षणों प्रशासित रहे हैं. Cued विलंबता, परीक्षण के लिए खोजने के लिए मंच और वेग दृश्य और मोटर समारोह के उपाय के रूप में उपयोग किया जाता है, क्रमशः. समूहों के बीच हो सकता है मौजूद संवेदी मोटर समारोह में मतभेद के रूप में अधिग्रहण और स्मृति के परिणामों की व्याख्या में इस चरण के दौरान प्रयोगात्मक समूहों के बीच अंतर को ध्यान में रखा जाना चाहिए. अधिग्रहण के चरण के लिए, विलंबता मतलब करने के लिए मंच और / या पथ लंबाई स्थानिक सीखने के उपाय के रूप में उपयोग किया जाता है. सामान्य जानवरों में बच, विलंबता धीरे – धीरे पाँच ऐसी है कि इसका मतलब भागने समय 5 दिन 15 से 20 सेकंड (छवि 5A) के आसपास है अधिग्रहण दिनों से अधिक कम हो जाती है. जांच के चरण के लिए मंच के लिए दूरी (छवि 5 ब) और / या विलंबता मतलब है कि पहली बार मंच के पिछले स्थान तक पहुँचने (छवि 5C </strong>) स्थानिक संदर्भ स्मृति के उपाय के रूप में उपयोग किया जाता है. उत्क्रमण के चरण के लिए, प्रतिशत समय पुराने बनाम नए चक्र में खर्च युक्त मंच perseveration के एक उपाय के रूप में प्रयोग किया जाता है. चार परीक्षण में, पुराने मंच स्थान के लिए वरीयता के नए मंच स्थान के लिए वरीयता के रूप में स्थापित है कमी (छवि 5D) चाहिए. 5. प्रतिनिधि परिणाम: चित्रा 1 हमारे संज्ञानात्मक परीक्षण मानदंड के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व. चित्रा 2 उपन्यास जगह मान्यता कार्य पर नियंत्रण जानवरों से प्रतिनिधि परिणाम. ए) कुल दो स्थानिक पदों की खोज समय बिताया परिचय चरण के दौरान लगभग बराबर होना चाहिए. बी) अन्वेषण अनुपात (उपन्यास पो तलाश समय बिताया/ sition दोनों पदों की खोज समय बिताया) उपन्यास 5 मिनट और 24 घंटे की देरी के अंतराल के बाद भौगोलिक स्थिति के लिए एक स्पष्ट पसंद से पता चलता है. धराशायी लाइन मौका प्रदर्शन का संकेत देता है. चित्रा 3 ऊंचा प्लस भूलभुलैया पर नियंत्रण जानवरों से प्रतिनिधि परिणाम. सामान्य जानवरों खुली बाहों (धराशायी लाइन द्वारा इंगित) में मौका द्वारा अपेक्षा से कम समय खर्च करते हैं. चिन्तित जानवरों नियंत्रण की तुलना में खुली बाहों में अनुपात में कम समय खर्च करते हैं, जबकि भूलभुलैया या anxiolytic एजेंटों के साथ उपचार के लिए कई जोखिम खुली बाहों में बिताए समय में वृद्धि होगी. चित्रा 4 डर कंडीशनिंग काम पर नियंत्रण जानवरों से प्रतिनिधि परिणाम. ठंड के निम्न स्तर के चैम्बर के लिए प्रारंभिक निवेश (आधारभूत के दौरान मनाया जाता है), और जब संदर्भ क्यू (पूर्व क्यू परीक्षण) परीक्षण से पहले बदल दिया है. इसके विपरीत, सामान्य जानवरों के बाद ठंड के व्यवहार में लगे प्रशिक्षण अवधि के सबसे अधिक खर्च करते हैं. अगर पशुओं के संदर्भ में प्रशिक्षण एक 24 घंटे की देरी के बाद हुआ याद है, वे संदर्भ 5 मिनट परीक्षण का लगभग 70% के लिए ठंड व्यवहार में संलग्न हैं. इसी तरह, अगर जानवरों टोन याद है, वे क्यू और क्यू के बाद परीक्षण के दौरान ठंड के उच्च स्तर बताते हैं. चित्रा 5 मॉरिस पानी भूलभुलैया काम पर नियंत्रण जानवरों से प्रतिनिधि परिणाम. ए) भागने विलंबता अधिग्रहण चरण के दौरान प्रगतिशील प्रशिक्षण के साथ कम हो जाती है. ) बी और सी) से दूरी और 1 पिछले 24 घंटे जांच परीक्षण के दौरान मंच स्थान पार विलंबता मतलब स्थानिक संदर्भ स्मृति के उपाय के रूप में उपयोग किया जाता है. डी) उलटा सीखने tes के अंतिम दिन पर मंच का स्थान बदलने के द्वारा मूल्यांकन किया हैting. 4 परीक्षणों में सामान्य जानवरों धीरे – धीरे पुराने वृत्त का चतुर्थ भाग खोज बंद करो और जानने के लिए कि मंच एक नए स्थान में है.

Discussion

लंबी अवधि के संज्ञानात्मक रोग के विकास कि कैंसर बचे ^12,13 में तेजी से आम होता जा रहा है पहिले से ग्रहण करने के लिए डिज़ाइन रणनीतियों के लिए एक दबाने की जरूरत है. स्टेम सेल चिकित्सा CNS में सामान्य ऊतक sequelae की एक श्रृंखला ameliorating के लिए साधन उपलब्ध कराने के रूप में वे खो दिया है या साइटोटोक्सिक कैंसर उपचार ¹⁴ से क्षतिग्रस्त कोशिकाओं की जगह के लिए अवसर प्रदान कर सकता है. इन प्रयासों की वसूली की रफ्तार बढ़ के लिए, हम प्रिंसिपल प्रयोगों कि cranially engrafted लिए कार्यात्मक ³ सीएनएस के विकिरणित ऊतक बिस्तर भीतर अनुभूति बहाल hNSCs की क्षमता की पुष्टि की है के सबूत की एक श्रृंखला शुरू की है. इस प्रयास के लिए महत्वपूर्ण करने के लिए मज़बूती से एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके में सावधानी से नियंत्रित संज्ञानात्मक परीक्षणों की एक श्रृंखला आयोजित करने की क्षमता थी. हम क्लिनिक में स्टेम सेल चिकित्सा translational क्षमता में तेजी लाने के प्रयासों में इन महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं विस्तृत है. आगे विचार कर रहे हैं किडेटा की गुणवत्ता का एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है की संभावना नीचे डाला जाता है.

संज्ञानात्मक परीक्षण विस्तार के लिए सावधान ध्यान देने की मांग और कलाकृतियों कि परिणामों की व्याख्या जटिल कुछ मानक प्रथाओं का पालन करने को कम करने में मदद कर सकते हैं. समर्पित व्यवहार परीक्षण पशु होल्डिंग कमरे और experimenters से अलग कमरे का उपयोग बेहतर है. यह भी है "सफेद शोर" है कि पशु सुविधा है कि हाथ में काम से जानवरों को विचलित कर सकते हैं बाहरी शोर ब्लॉक का उपयोग करने के लिए समझदारी है. संज्ञानात्मक परीक्षण के लिए किस्मत में जानवरों के लिए तनाव को कम करने के लिए, यह उनके लिए महत्वपूर्ण है experimenters कि व्यवहार परीक्षण कार्य प्रशासन से पहले प्रदर्शन करेंगे के साथ परिचित होने के लिए. सामान्य में, अगर महिलाओं और पुरुषों का परीक्षण, यह महिलाओं के पहले परीक्षण के रूप में वे परीक्षण के दौरान अधिक उत्सुक हो अगर पुरुष गंध cues परीक्षण Arenas में रहते हैं की सिफारिश की है. जब कार्यों का एक धारावाहिक बैटरी प्रशासन, यह महत्वपूर्ण है घास का मैदान के लिए जानवरों को बेनकाबसेंट तनावपूर्ण 1 कार्यों (EPM की तरह, NPR) और सबसे तनावपूर्ण पिछले कार्यों (एफसी की तरह, MWM).