Ein Protokoll zur Durchführung einseitige 6-OHDA Läsionen der mediale Vorderhirnbündel in Mäusen beschrieben. Dieses Verfahren hat eine niedrige Mortalitätsrate (13,3%) mit 89% der überlebenden Tiere mit> 95% Verlust von striatalen Dopamin und 90,63 ± -4,02% ipsiversive Drehvorspannung nach der Seite der Läsion.
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Methodenartikel
Entwicklung eines Einseitig-läsionierten 6-OHDA Mausmodell der Parkinson-Krankheit
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die einseitig verletzten 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-Läsion Rattenmodell der Parkinson-Krankheit (PD) hat sich als zu einem besseren Verständnis der Mechanismen der Parkinson-Symptome von unschätzbarem Wert, da er rekapituliert die Veränderungen in den Basalganglien Schaltung und Pharmakologie in beobachtet Parkinson-Patienten 1-4. Jedoch bleiben die genauen zellulären und molekularen Veränderungen bei kortiko-striatalen Synapsen der Ausgang Wege in das Striatum, das die wichtigen Input Region der Basalganglien ist schwer zu fassen, und dies wird angenommen, dass Ort, an dem zugrunde liegenden pathologischen Auffälligkeiten Parkinson-Symptome entstehen 3 sein , 5.
In PD, hat das Verständnis der Mechanismen, die Veränderungen in den Basalganglien Schaltung folgende Degeneration der nigro-striatalen Bahn wurde stark durch die Entwicklung von Bacterial Artificial Chromosome (BAC) Mäuse vorangetrieben überexprimierenden grün fluoreszierende Proteine durch Förderung angetriebenRS spezifische für die beiden striatalen Bahnen Ausgang (direkter Weg: eGFP-D1; indirekten Weg: eGFP-D2 und eGFP-A2a) 8, so dass sie in Isolation untersucht werden. Zum Beispiel haben neuere Studien nahelegen, dass es pathologische Veränderungen in der synaptischen Plastizität in Parkinson-Mäusen 9,10. Diese Studien jungen Mäusen und akuten Modellen von Parkinsonismus verwendet. Es ist unklar, ob die Veränderungen bei erwachsenen Ratten, die mit stabilen 6-OHDA Läsionen beschrieben auch in diesen Modellen auftreten. Andere Gruppen haben versucht, eine stabile unilateral lädierten-6-OHDA erwachsenen Maus-Modell der PD durch Läsion des medialen Vorderhirnbündel (MFB) zu erzeugen, leider war die Mortalitätsrate in dieser Studie sehr hoch, mit nur 14% für die Operation überlebt 21 11 Tage oder länger. Neuere Studien haben intra-nigralen Läsionen sowohl mit einer niedrigen Sterblichkeitsrate generiert> 80% Verlust von dopaminergen Neuronen jedoch Ausdruck von L-DOPA-induzierte Dyskinesien 11,12,13,14 war variabelIn diesen Studien. Eine andere gut etablierte Mausmodell der PD ist der MPTP-behandelten Maus 15. Während dieses Modell hat sich bewährt, bei der Beurteilung der potenziellen neuroprotektive Mittel 16 ist es weniger geeignet für das Verständnis der Mechanismen, die Symptome der PD, wie dieses Modell oft nicht gelingt, motorische Defizite zu induzieren, und zeigt eine große Variabilität in der Ausdehnung der Läsion 17, 18 .
Hier haben wir eine stabile unilateralen 6-OHDA-lädierten Mausmodell der PD durch direkte Verabreichung von 6-OHDA in das MFB entwickelt, die konsequent verursacht> 95% Verlust von striatalen Dopamin (gemessen durch HPLC), sowie die Herstellung der Verhaltens- Ungleichgewichte beobachtet in der Vertiefung dadurch einseitige 6-OHDA-lädierte Ratten-Modell der Parkinson. Diese neu entwickelte Mausmodell der PD wird ein wertvolles Instrument für das Verständnis der zugrunde liegenden Mechanismen Generation von Parkinson-Symptome.
Protokoll
1. Wohnungs-und Zubereitung von Mäusen
- Achten Sie auf eine Kolonie von Bacterial Artificial Chromosome (BAC) angetrieben transgenen Mäusen 8 (Mutant Mouse Regional Resource Center (MMRRC) FVB in einem 12:12 h Licht-Dunkel-Zyklus mit freiem Zugang zu Nahrung und Wasser. Diese Mäuse sind reine FVB-Mäusen und Es ist nicht erforderlich, diese Mäuse mit einem anderen Stamm zu überqueren, entweder zur Zucht oder für den Erfolg der 6-OHDA Läsion Verfahren zu gewährleisten.
- Um eine Parkinson-Modell zu erzeugen, werden erwachsene Mäuse im Alter von 31 bis 42 postnatalen Tag (P31-42) für 6-OHDA-Läsion und Schein-Operationen erforderlich.
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Diskussion
Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Erzeugung eines stabilen einseitigen 6-OHDA-Läsion Maus-Modell der Parkinson-Krankheit, die extrem reproduzierbar, mit einer hohen Erfolgsrate Läsion und eine geringe Sterblichkeit ist. Der Erfolg von 6-OHDA Läsion Operation kann leicht durch die Messung von spontanen Drehverhalten werden mit> 70% ipsiversive Umdrehungen anzeigt> 95% Dopaminverarmung im Striatum Läsion 27 veranschlagt. Die Quantifizierung der striatalen Dopamin-Spiegel ist die genaueste Mess.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde von der Abteilung für auswärtige Angelegenheiten und internationalen Handel (Regierung von Kanada), University of Toronto Connaught Fund, der kanadischen Stiftung für Innovation, NSERC, der Krembil Foundation und The Cure Parkinson-Stiftung unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes Unternehmen Katalog-Nummer Kommentare (optional) | |||
| Desipramin HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Kanada | D125 | 25mg/kg |
| Pargylin HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Kanada | P8013 | 5mg/kg |
| 6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Kanada | H116 | 3 mg / Maus |
| Stereotaktischen Rahmen | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Modell 900 | |
| Maus Ohrmuscheln | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Modell 921 Zygoma Ohrenpolster | |
| Maus Schneidezahn bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Modell 923B | |
| Maus Narkosemaske | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Modell 923B | |
| Priming-Kit (enthält 250ml Spritze) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
| RN Klemmverschraubung Kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
| PEEK Kapillaren aus RN Klemmverschraubung Kit< (1/16 Th Zoll) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
| Dual kleinen Hub RN-Koppler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
| Luer zu kleinen Hub RN-Adapter | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
| 1ml Spritze Modell 25S 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
| * 33G mit austauschbarer Nadel (RN) 6er Pack. . Custom 1 Zoll mit 45 <° Fase | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
| Scheren | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada. | 14084-08 | |
| Skalpell | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada | 10003-12 | |
| Skalpellklingen | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada | 10035-20 | |
| Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada | 11608-15 | |
| Hämostyptika | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada. | 13004-14 | |
| Isofluran | Abt | 02241315 | 2-3% |
| Suters (Vicryl 4,0) | Syneture | SS-683 | |
| Sterilisator | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Kanada | 18000-45 | |
| Infusionspumpe | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
| Nadeln (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
| Nadeln (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
| Spritzen (1 ml) | BD Spritze | 309692 | |
| Anästhesie Trolley | LEI medizinische | M2000 | |
| Baytril | CDMV, St. Hyacinthe, QC | 102207 | |
| Lidocain | CDMV, St. Hyacinthe, QC | 3914 | |
| Betadine Lösung | CDMV, St. Hyacinthe, QC | 19955 |
Referenzen
- Costall, B., Naylor, R. J., Pycock, C. Non-specific supersensitivity of striatal dopamine receptors after 6-hydroxydopamine lesion of the nigrostriatal pathway. Eur. J. Pharmacol. 35, 276-283 (1976).
- Maneuf, Y. P., Mitchell, I. J., Crossman, A. R., Brotchie, J. M.
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Nachdrucke und Genehmigungen
