Chromosomics: détection d'altérations numériques et structurelles dans les 24 chromosomes de l'homme en utilisant simultanément un dosage FISH Novel OctoChrome
Summary
Un roman de fluorescence<em> In situ</emHybridation> (FISH) méthode qui examine simultanément à la fois des altérations chromosomiques numériques et structurelles, en particulier les translocations spécifiques chromosomiques associées à la leucémie et le lymphome, de tous les 24 chromosomes humains sur un seul appareil dans une hybridation, est décrite.
Abstract
L'hybridation fluorescente in situ (FISH) est une technique qui permet des séquences d'ADN spécifiques à détecter sur les chromosomes en métaphase ou en interphase en 1 noyaux des cellules. La technique utilise des sondes d'ADN avec des séquences uniques qui s'hybrident aux chromosomes entiers ou régions chromosomiques spécifiques, et sert de complément à la cytogénétique classique. Par exemple, de nombreuses études antérieures a signalé la détection fréquente des aberrations chromosomiques dans les patients atteints de leucémie a augmenté en rapport avec l'exposition au benzène, le benzène-intoxication des patients, et les travailleurs en bonne santé exposés au benzène, à l'aide d'une analyse cytogénétique classique 2. Utiliser du poisson, la leucémie spécifiques des altérations chromosomiques ont été observées à être élevée chez les travailleurs apparemment en bonne santé exposés au benzène 3-6, indiquant les rôles critiques de changements cytogentic dans la leucémogenèse induite par le benzène.
En règle générale, un test FISH unique examine seulement un ou quelques chromosomes entiersou des loci spécifiques par diapositive, etc hybridations multiples doivent être menées sur plusieurs diapositives pour couvrir l'ensemble des chromosomes humains. Caryotype spectral (SKY) permet la visualisation de l'ensemble du génome simultanément, mais l'exigence d'un logiciel spécial et les limites de son application matériel 7. Ici, nous décrivons un test FISH roman, OctoChrome-FISH, qui peut être appliqué pour Chromosomics, que nous définissons ici comme l'analyse simultanée de tous les 24 chromosomes humains sur une lame dans les études de l'homme, telles que l'étude aneuploïdie chromosomique à l'échelle (CWA) 8. La base de la méthode, commercialisé par Cytocell que le système Chromoprobe Multiprobe, est un dispositif OctoChrome qui est divisée en 8 carrés, dont chacun porte trois différentes sondes de peinture chromosomique entières (Figure 1). Chacun des trois sondes sont directement marquées avec un fluorophore de couleur différente, verte (FITC), rouge (Texas Red), et le bleu (coumarine). L'agencement des combinaisons chromosomiques sur le OctoChromdispositif de e a été conçue pour faciliter l'identification des altérations chromosomiques non aléatoires structurelles (translocations) trouvés dans les leucémies et les lymphomes les plus courantes, pour t par exemple (9, 22), t (15; 17), t (8; 21 ), t (14; 18) 9. En outre, les changements numériques (aneuploïdie) dans les chromosomes peuvent être détectés simultanément. La diapositive modèle correspondant est également divisée en 8 carrés sur lequel se propage en métaphase sont liés (figure 2), et est positionné sur le dispositif OctoChrome. Les sondes et l'ADN cible sont dénaturés à haute température et hybridé dans une chambre humide, puis tous les 24 chromosomes de l'homme peuvent être visualisées simultanément.
POISSON OctoChrome est une technique prometteuse pour le diagnostic clinique de la leucémie et le lymphome et pour la détection d'aneuploïdies dans tous les chromosomes. Nous avons appliqué cette nouvelle approche chromosomique dans une étude de la CWA travailleurs exposés au benzène chinois 8,10.
Protocol
Discussion
Ce roman OctoChrome-FISH test permet d'examiner simultanément toutes les 24 chromosomes de l'homme dans une hybridation unique sur une seule lame. L'agencement des combinaisons chromosomiques sur les 8 carrés a été conçu pour faciliter l'identification des réarrangements chromosomiques non aléatoires dans les leucémies et les lymphomes les plus courantes. Ainsi, le dosage peut détecter numérique (aneuploïdie) ainsi que structurelles altérations chromosomiques (translocations) concurremment. <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Cliona M. McHale pour la lecture critique et la relecture du manuscrit. Ce travail a été financé par l'Institut national de l'environnement Sciences de la Santé, l'Institut national de la Santé de subvention R01ES017452 à L Zhang.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| OctoChrome Kit | Cytocell Ltd, Cambridge, UK | PMP 803 | |
| phytohaemagglutinin (PHA) | Invitrogen Corporation | 10576-015 | |
| Colcemid | Invitrogen Corporation | 15212-012 | |
| Carnoy’s fixative | Methanol : glacial acetic acid = 3: 1 | ||
| Fluorescence microscope | Equipped with filters to view DAPI, Texas Red, FITC, and Coumarin spectra individually and a DAPI/FITC/Texas Red triple filter to view different colors simultaneously | ||
| Metafer software | MetaSystems, Altlussheim, Germany | Facilitate to locate all metaphases and to re-evaluate the abnormalities |
References
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