गर्भनाल रक्त से साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों विस्तार कि लक्ष्य Cytomegalovirus, Epstein-बर्र वायरस, और adenovirus
Summary
यहाँ हम 1 अच्छा विनिर्माण (जीएमपी) अभ्यास अनुरूप गर्भनाल रक्त, मुख्य रूप से अनुभवहीन टी कोशिकाओं के एक स्रोत से वायरस विशेष साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों (सीटीएल) के उत्पादन की विधि का वर्णन है.
Abstract
स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण के वायरस के संक्रमण के बाद मौत का सबसे आम कारणों में गर्भनाल रक्त के बाद, विशेष रूप से कर रहे हैं (सीबी) प्रत्यारोपण (सीबीटी) जहां सीबी वायरस अनुभवी टी कोशिकाओं जो संक्रमण से प्राप्तकर्ता की रक्षा कर सकते हैं 1 सराहनीय संख्या शामिल नहीं है. 4 हम और दूसरों से पता चला है कि वायरस विशेष सीटीएल सेरोपॉज़िटिव दाताओं से उत्पन्न होती है और प्राप्तकर्ता को संचार सुरक्षित और सुरक्षात्मक 5-8 हालांकि, हाल ही में जब तक, वायरस विशेष टी कोशिकाओं गर्भनाल रक्त से उत्पन्न नहीं, हो सकता है की वजह से कर रहे हैं. वायरस विशेष स्मृति टी कोशिकाओं के अभाव.
एक बेहतर भोले टी कोशिकाओं की vivo भड़काना परिस्थितियों में नकल करने के प्रयास में, हम एक तरीका है कि सीबी व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) का इस्तेमाल एक adenoviral (Ad5f35pp65) वेक्टर immunodominant सीएमवी pp65 प्रतिजन युक्त साथ transduced की स्थापना की है, इसलिए टी सेल विशिष्टता ड्राइविंग सीएमवी और दीक्षा में adenovirus. 9 की ओर, हम इन मा का उपयोगखंडित रूप में के रूप में अच्छी तरह से DCs साइटोकिन्स 7-आईएल, आईएल 12, और आईएल 15 10 2 उत्तेजना हम EBV तब्दील बी कोशिकाओं का इस्तेमाल किया, या EBV LCL, जो दोनों व्यक्त की उपस्थिति में सीबी व्युत्पन्न टी कोशिकाओं अव्यक्त और lytic EBV प्रतिजनों. Ad5f35pp65 transduced EBV LCL 2 उत्तेजना में आईएल-15 की उपस्थिति में टी कोशिकाओं को प्रोत्साहित करने के लिए किया जाता है. बाद के stimulations EBV LCL और IL-2 Ad5f35pp65 transduced का उपयोग करें.
50×10 6 सीबी mononuclear कोशिकाओं से हम 150 x 10 6 वायरस विशेष टी कोशिकाओं है कि प्रतिजनी उत्तेजना जवाब में प्रतिजन स्पंदित लक्ष्य और रिहाई साइटोकिन्स lyse के ऊपर उत्पन्न करने में सक्षम हैं 11 इन कोशिकाओं. जीएमपी-compliant तरीके में निर्मित का उपयोग कर रहे थे एक fractionated गर्भनाल रक्त इकाई का 20% अंश और नैदानिक इस्तेमाल के लिए अनुवाद किया गया है.
Protocol
Discussion
सीबीटी के बाद वायरल संक्रमण को नियंत्रित करने के उद्देश्य से वर्तमान रणनीतियों प्रभावी हो सकता है, कर सकते हैं लेकिन वे महत्वपूर्ण toxicities साथ जुड़े रहे हैं, महंगे हैं, और बाद में संक्रमण के खिलाफ लंबे स?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एक दान एल डंकन सहयोगात्मक अनुसंधान अनुदान (CMB और EJS), राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े, और रक्त संस्थान (US4HL081007), एक लेकिमिया और लिंफोमा सोसाइटी क्लीनिकल रिसर्च स्कॉलर अवार्ड (CMB), और राष्ट्रीय कैंसर संस्थान द्वारा समर्थित किया गया (CA06150816 RO1, EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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