La expansión de los linfocitos T citotóxicos sangre del cordón umbilical que Citomegalovirus Target, Virus de Epstein-Barr, adenovirus y
Summary
Aquí se describe la primera práctica de fabricación (GMP)-cumple método de producción de virus específicos de los linfocitos T citotóxicos (CTL) de la sangre del cordón umbilical, una fuente de células T predominantemente ingenuo.
Abstract
Las infecciones de virus después de un trasplante de células madre se encuentran entre las causas más comunes de muerte, sobre todo después de la sangre del cordón (CB) trasplante (CBT), donde el CB no contiene cantidades apreciables de células T del virus con experiencia que pueden proteger al destinatario de la infección 1. – 4 Nosotros y otros han demostrado que el virus de CTL específico generado a partir de donantes seropositivos y se infunde al destinatario son seguros y protectores. 5-8 Sin embargo, hasta hace poco, virus específicos de las células T no podría ser generado a partir de sangre de cordón, probablemente debido a la ausencia de virus específicos de las células T de memoria.
En un esfuerzo para imitar mejor las condiciones en el cebado in vivo de las células T vírgenes, se estableció un método que utiliza CB-derivados de las células dendríticas (DC) transducidas con un vector adenoviral (Ad5f35pp65) que contiene el antígeno inmunodominante CMV pp65, por lo tanto, conducir especificidad de las células T hacia CMV y adenovirus. 9 Al inicio, utilizamos estas máquinasDCs estructurados, así como CB derivados de células T en la presencia de las citoquinas IL-7, IL-12 e IL-15. 10 En la segunda estimulación se utilizó el EBV de células B transformadas, o EBV-LCL, que expresan tanto latente y antígenos para el VEB lítico. Ad5f35pp65-EBV-LCL transducidas se utilizan para estimular las células T en presencia de IL-15 en la segunda estimulación. Estimulaciones posteriores utilizar Ad5f35pp65-EBV-LCL transducidas y IL-2.
De 50×10 6 células mononucleares CB somos capaces de generar más de 150 x 10 6 virus específicos de las células T que lisan los impulsos de antígeno-objetivos y liberación de citoquinas en respuesta a la estimulación antigénica. 11 Estas células se fabrican de una manera GMP usando sólo la fracción de 20% de una unidad de sangre de cordón se fraccionó y se han traducido para el uso clínico.
Protocol
Discussion
Las actuales estrategias encaminadas a controlar las infecciones virales después de la TCC puede ser eficaz, pero están asociados con toxicidades significativas, son caros, y no confieren protección a largo plazo contra la infección posterior. De hecho, el uso de algunos fármacos antivirales pueden limitar la expansión de las células T específicas de virus que de otro modo serían de protección. 14 Otra opción es la infusión de las células derivadas del donante T específicos para el virus. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por un Dan L. Duncan beca de investigación colaborativa (CMB y EJS), el Instituto Nacional del Corazón Pulmón, y Sangre (US4HL081007), una Sociedad de Leucemia y Linfoma Investigación Clínica premio Scholar (CMB), y el Instituto Nacional del Cáncer (RO1 CA06150816; EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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