Ex Vivo organotípicos Modelo corneal aguda de herpes simplex virus tipo epitelial que la infección

Summary

En este artículo de vídeo se describe el uso de un nuevo<em> Ex vivo</em> Modelo de herpes simplex virus tipo agudas que la infección del epitelio corneal.

Abstract

La queratitis herpética es una de las patologías más graves asociadas con el virus del herpes simple de tipo 1 (HSV-1). La queratitis herpética es actualmente la principal causa de ceguera tanto córnea-derivado y las infecciones asociadas-en el mundo desarrollado. Presentación típica de la queratitis por herpes incluye la infección del epitelio corneal y el estroma a veces córnea más profunda y el endotelio, lo que conduce a patologías corneales tales como cicatrices permanentes, adelgazamiento, y la opacidad ^1.

Corneal infección HSV-1 es tradicionalmente estudiado en dos tipos de modelos experimentales. El modelo in vitro, en el que las monocapas de cultivo de células epiteliales corneales infectadas en una placa de Petri, ofrece simplicidad, alto nivel de replicabilidad, experimentos rápidos y los costos relativamente bajos. Por otro lado, el modelo in vivo, en el que los animales tales como conejos o ratones se inoculan directamente en la córnea, ofrece una fisiológica altamente sofisticadosistema, pero tiene costos más altos, más largos experimentos, cuidado de animales necesario, y un mayor grado de variabilidad.

En este artículo de vídeo, se proporciona una demostración detallada de un modelo ex vivo de nuevo corneal epitelial infección HSV-1, que combina las ventajas tanto de la vitro y en modelos in vivo en el. El modelo ex vivo utiliza córneas intactas organotypically mantenidas en cultivo e infectadas con HSV-1. El uso del modelo ex vivo permite conclusiones altamente fisiológicamente basadas, sin embargo, es bastante barato y requiere dedicación de tiempo comparable a la del modelo in vitro.

Protocol

Todos los reactivos y equipos se compraron estéril o se esterilizaron antes del procedimiento. En este artículo se describen los pasos para la implantación del modelo ex vivo a partir de la vista pre-enucleado. En nuestros experimentos, utilizamos ojos frescos enteros de jóvenes (8-12 semanas) conejos albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). Además, utilizamos córneas humanas obtenidas a partir del banco de ojos local. Si se realiza enucleación usted mismo, tenga cuidado de no dañar la córnea o el …

Discussion

En este artículo de vídeo se describe un método para el estudio agudo corneal epitelial infección HSV-1 en un modelo ex vivo. Este modelo es un escalón útil entre la in vitro y la modelos in vivo, ya que permite la validación fisiológicamente precisa de los resultados de cultivo de células y, por lo tanto, limita la cantidad de experimentación animal que debe ser realizada. Además, el modelo ex vivo ofrece una oportunidad única y valiosa para estudiar la infecció…

Materials

Reagents/Supplies	Company	Catalogue #
Minimum Essential Medium (MEM)	Mediatech	10-010-CV
Non-Essential Amino Acids (100x solution)	Mediatech	25-025-CI
L-Glutamine	Mediatech	25-005-CI
Penicillin G Sodium Salt	Sigma	P3032
Streptomycin Sulfate Salt	Sigma	S9137
Agarose	Invitrogen	15510-027
Phosphate Buffered Saline (PBS)	Prepared in lab	N/A
Trypsin EDTA (1x)	Mediatech	25-053-CI
DNeasy Blood & Tissue Kit	QIAGEN	69504
RNeasy Mini Kit	QIAGEN	74104
Laemmli Buffer	Prepared in lab	N/A
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound	Tissue-Tek	4583
Whole Rabbit Eyes (Young)	Pel-Freez	41211-2
Human Corneas and Whole Eyes	Local Eye Bank	N/A
12 Well Porcelain Spot Plate	Avogadro’s Lab Supply	1877
35 mm Tissue Culture Dish	Falcon	353001
6 Well Cell Culture Plate	Greiner Bio-One	657160
Cryomold Intermediate	Tissue-Tek	4566