無菌マウスでのプログレッシブ植民地時代に肝代謝変化を評価する 1 H NMR分光法
Summary
プログレッシブ植民地化の手順は、さらにホストの肝代謝への影響を評価するために記述されています。肝代謝が高分解能マジック角スピニング（人事MAS）無傷の生検のNMRプロファイリングによって評価されている間植民地化は、NMRベースの代謝プロファイリングによる共同代謝微生物の尿中排泄を評価することにより、侵襲的、非監視されます。
Abstract
それは、腸内細菌がこのような免疫保護とビタミンの合成など、さまざまな利点を提供し、ホストの恒常性に大きく貢献することはよく知られています。彼らはまた、このエコシステムに不可欠な代謝の臓器作り、栄養素のかなりの量のホストを指定します。ホストとその腸内細菌叢との間の代謝相互作用を理解する腸内細菌叢とメタボリックシンドロームとの間のリンク、の増加する証拠の文脈では、現代生物学の重要な課題となってきています。1-4
植民地化は（また、正規化のプロセスとも呼ばれる）の元無菌動物における微生物の設立を指定します。それは、出生時に発生する自然なプロセスですが、それはまた腸花生態系を制御し、さらにホストの代謝への影響を判断するために成人無菌動物で使用されています。植民地化のプロセスを制御するための一般的な手順は、singlで強制経口投与の方法を使用することです。eまたは微生物の混合物。このメソッドは、非常に迅速に植民地化の結果、5非常にストレスであることの不利を提示。したがって、ストレスを最小限に抑え、徐々にホストの代謝上の細菌の設立の影響を観察するために低速の植民地化のプロセスを取得すると便利です。
この原稿では、我々は非破壊メタボリックプロファイリング技術を使用して徐々に植民地化の過程で肝代謝の変更を評価する手順を説明します。我々は、1 H NMRベースの代謝プロファイリングによる共同代謝微生物の尿中排泄により反射された腸内微生物の代謝活性を評価することによって、腸内微生物のコロニー形成を監視するために提案する。これは通常、DGGE（勾配ゲル電気泳動を変性）による糞便細菌を監視することにより評価した腸内微生物生態系の安定した設置を超える腸内微生物活性の安定性の理解が可能になります。6植民地化は、従来のオープンな環境で行われ、汚れたゴミ対照となる従来の動物、で汚れたによって開始されます。糞食性の動物がいるげっ歯類は、これは前述のように均質な植民地化を保証します
肝代謝プロファイリングは、NMR分光法をスピニング1 H高分解能マジック角を使用して無傷の肝生検から直接測定されます。この半定量的な手法は、さらに植民地化のプロセスと肝代謝70から10の間の複雑な相互作用を推定するために、セル構造に損傷を与えることなく、そのようなトリグリセリド、グルコースとグリコーゲンなどの主要な代謝物を評価するための素早い方法を提供しています。このメソッドは任意の組織生検11,12に適用することもできます。
Protocol
1。無菌動物とサンプル採取の植民地化無菌アイソレーターと家それらのコントロール（図1）となる従来の動物の前にフィルターを装備したケージの中で、従来の飼育室内から動物を取り外します。 無菌動物のくずで制御従来のケージから取り出したゴミ（3日齢）の半分を混ぜる。常に汚れた従来のゴミの1 / 3は、細菌のレベルを（少なくとも3日間それを保つ）を維持するた?…
Discussion
このプロトコルでは、我々はさらに無傷の生検の1 H人事MAS NMRのプロファイリングにより評価された肝代謝で腸内細菌の影響を調査するためにオープンな環境で進歩的な植民地化の手順を説明した。植民地化の様々な方法が文献に記載されている。定義された細菌を持つ動物を植民地化する最も一般的な方法は強制経口投与または汚染された飲料水19,20です。糞便の接種は、前…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
例示的な例として使用されるすべてのNMRスペクトルは、財政的にネスレでサポートされていた以前に発行された研究7から派生しています。
Materials
Table of specific reagents and equipment:
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| 2.5 mm microtube | New Era | NE-H5/2.5-V-Br | |
| 1.7 mm capillary tube | Sigma-Aldrich | NORS175001 | |
| Capillary adapter | New Era | NE-325-5/1.7 | |
| Extraction rod | New Era | NE-341-5 | |
| HR-MAS rotor BL4 with 50 μL spherical Teflon spacer kit |
Bruker | HZ07213 | |
| Tool kit for 50 μL inserts | Bruker | B2950 | |
| Advance III 600 MHz NMR | Bruker | ||
| 1H HR MAS NMR solid probe | Bruker | ||
| Deuterium oxide 99.9 % | Sigma-Aldrich | 530867-1L | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic acid-d4 (TSP) |
Sigma-Aldrich | 269913 |
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Cite This Article
Heath, P., Claus, S. P. Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy. J. Vis. Exp. (58), e3642, doi:10.3791/3642 (2011).