後期胚と新生児マウスの計測左心室圧
Summary
胎児および新生児のマウスで左心室圧（LV）を測定することが記載されています。圧は超音波ガイド下のLVに液体で満たされたトランスデューサーに接続された針を挿入することによって測定されます。ケアは実験プロトコルの間に正常な心臓機能を維持するために注意する必要があります。
Abstract
血圧は、脊椎動物の胚及び生後発達の間に大幅に増加します。マウスにおいて、血流は、胚日（E）8.5約1最初に検出可能である。収縮期左心室（LV）の圧力はE9.5で2 mmHgとE14.5 2で11 mmHgである。肋骨と皮膚が完全に開発されていないため、これらの中期胚の段階で、LVは侵襲的な圧力測定のための胸壁を通してはっきりと見えるようになります。 E14.5および出生（約E21）の間の撮像方法は、LVを表示するために使用する必要があります。出生後、30日から動脈圧の上昇を意味する-生後から70 mmHgで（P）2 – 35 3。 P20を超えて、動脈圧は、ソリッド·ステート·カテーテル（すなわち、ミラーまたはScisense）で測定することができます。 P20の前に、これらのカテーテルは、マウスの動脈と動脈圧を開発するためには大きすぎるが液体で満たされた圧力変換器3またはガラスマイクロピペットATTに接続されているカスタム引っ張らプラスチックカテーテルを用いて測定する必要がありますサーボヌル圧力トランスデューサ4に痛んだ。
我々の最近の仕事は、血圧の最大の増加5-7マウスの出生後早期に後期胚の発生したことを示している。血圧のこの大幅な増加は、発展途上動脈の平滑筋細胞（SMC）表現型に影響を与え、重要なメカノイベントをトリガすることができる。開発動脈の機械的性質は、細胞外マトリックスタンパク質（すなわち、マルファン症候群8および大動脈弁上狭窄9）の欠陥によって侵害され、ヒトの疾患では、この期間中に血圧の急激な変化は、メカノの変化を介して疾患の表現型および重症度に貢献するかもしれない信号。したがって、ヒト疾患のマウスモデルの後期胚および新生児の期間中の血圧の変化を測定できるようにすることが重要です。
我々は後半にLV圧を測定する方法について説明します。胚（E18）と出生後早期（P1 – 20）マウス。液体で満たされた圧力変換器に接続されている針は超音波ガイド下LVに挿入されます。ケアは、特にマウス胎児のために、実験プロトコルの間に正常な心臓機能を維持するために取られます。代表的なデータが提示され、プロトコルの制限が議論されています。
Protocol
Discussion
ここで紹介するプロトコルは、後半の胚と早期新生児マウスのLV圧を測定する方法を提供する。このプロトコルの主な制限は、圧力システムの時間分解能である。それは器に針を通してLVから移動する、唯一の圧力値が記録されることを意味するように圧力信号が減衰されています。減衰は、可能な最大の針を使用することによって最小限に抑えることができますが、針は、さまざまな高齢者…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHの助成金HL087653とHL105314によって、部分的に資金を供給された。メソッドのいくつかは、医学のワシントン大学で博士ロバートMechamの研究室で開発されました。
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
| High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
| Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
| Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
| Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
| Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
| Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
| Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
| 3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
| 30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Various suppliers | ||
| Heparin | Various suppliers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
References
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos. Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).
- Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).
- Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice. Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).
- Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).
- Wagenseil, J. E. Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice. Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).
- Wagenseil, J. E. The importance of elastin to aortic development in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).
- Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. Extracellular microfibrils in development and disease. Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).
- Li, D. Y. Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis. Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).
- Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).
- Phoon, C. K. Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development. Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).
