Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Özet

Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Özet

Enükleasyon dünyanın geri kalanı rahat bırakmak, bir kadavra donörden oküler dünyanın alma işlemidir. Eksizyon oküler dünya onu ayrı keserek, oküler dokularda, özellikle kornea alma anlamına gelir. Eviserasyon retina gibi burada sözü edilen iç organlarının çıkarılması işlemidir. Oküler dünya kornea, sklera, vitreus, lens, iris, retina, koroid, kaslar vb (Ek Şekil 1) oluşur. Bir hasta kornea hasarı sorunum olduğunda, kornea kaldırılması gerekiyor ve sağlıklı bir keratoplastic ameliyatları tarafından nakledilen gerekir. Genetik bozukluklar veya retinal fonksiyon kusurları görme bozabilir. İnsan göz küreleri göz gibi bankacılık, insan kornea veya sklera nakli ve oküler dokular üzerinde araştırma gibi çeşitli cerrahi işlemler için kullanılabilir. Ancak, insan kornea kalınlığı ve retina eksizyon pek fazla bilgi Muhtemelen, l nedeni varinsan dokularına imited erişilebilirlik. Benzer prosedürler açıklayan çalışmaların çoğu hayvan modelleri üzerinde gerçekleştirilir. Araştırma bilim adamları, insan göz gelişimi, homeostasis ve işlevine bilgilerini genişletmek için uygun bir şekilde diseke ve iyi korunmuş oküler dokuların durumu güveniyor. Biz bunların yaklaşık% 40 (Tablo 1) araştırma amaçlı kullanılan vardır out oküler küreler yüksek miktarda aldıkça, tüketim teknikleri tanımlayarak, bu dokular üzerindeki deneylerin büyük miktarda gerçekleştirmek ve bunları düzenli olarak muhafaza edebiliyoruz.

Kornea retina üzerine ışık iletimi sağlar ve bu amaçla her zaman şeffaflık iyi derecede tutmalıdır avasküler bir dokudur. Kornea içinde, kök hücrelerin bir rezervuar olduğu limbus bölgede, epitel hücrelerinin yeniden yardımcı olur ve kornea şeffaflık ve açıklık korumak konjonktiva aşırı kısıtlar. Boyutu ve th bunlardan birini değişiklikler dalıp, belirsiz vizyon yol açabileceği gibi korneanın ickness, net görüş için önemlidir. Kornea 5 katmandan oluşur; endotelyum a) epitel, b) Bowman tabakası, c) stroma, d) Descemet membran ve E). Tüm katmanları net bir vizyon ^4,5,6 sağlamak için düzgün çalışması gerekir. Koroid Bruch membranı ile iç sınırlanmış sklera ve retina arasındaki ara tunik, ve gözün kan akışından sorumludur. Koroidin da retinanın ^5,6 dış tabakaları için sıcaklık ve malzeme besleme düzenleyen yardımcı olur. Bir photoreceptive parçası olmayan bir alıcı parçası: retinanın oküler küre (Ek Şekil 1) arka kapsar ve iki bölümden oluşur sinir dokusunun bir katmandır. Retina, kornea ve lens gelen ışığı almak için yardımcı olur ve sonunda optik sinir ^5,6 yardımı ile beyne iletilir kimyasal enerjiye dönüştürür. bu doku amaçlayan araştırma amaçlı vazgeçilmez olarak ove_content "> Bu yazının amacı, insan oküler küreler gelen kornea kalınlığı ve retina dokuların diseksiyonu için bir protokol sağlamaktır. komşu dokuları ile çapraz bulaşmayı önleme ve RNA bütünlüğünün korunması temel bir öneme sahiptir (i) oküler dokuların transcriptome, (ii) karakterize rejeneratif tıp projeleri için kök hücre izolasyonu, ve (iii) etkilenen / Normal bireylerden dokular arasındaki histolojik farklılıkları değerlendirmek. Bu yazıda tekniği tarif şu anda kaldırmak için kullanabileceğiniz kornea, bir göz Dünya'dan koroid ve retina dokularında. Burada insan göz küresi ve kornea kalınlığı ve retina dokularının eksize diseksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar. beraberindeki Video araştırmacılar alımı için uygun bir tekniği öğrenmek için yardımcı olacak düzenli bulması zor değerli insan dokularının.

Protokol

1. Kornea in situ olarak eksizyonu Oküler Küre gelen

1. Yaklaşık 15 dakika kullanmadan önce laminar hava akımı kabini açın. % 70 izopropil alkol kullanarak laminar akım temizleyin. Bu tür cerrahi kap ve maske gibi kişisel koruyucu giysiler giyin. El ve ön kol fırçalayın ve steril bir havlu ile kurulayın. Aseptik teknik kullanarak steril eldiven ve önlük veya kollu giyin.
2. Aseptik olarak steril bir alet tepsisine yerleştirerek steril alan ayarlayın. Aletler steril olduğundan emin olun. Steril alet paketi açın ve herhangi bir kontaminasyon kaçınarak steril bölgeye çevirin.
3. Bu kullanım kolaylığı için steril alanın kenarına bitişik ola....

Tartışma

Doğru eksizyon ve kornea kalınlığı ve retina dokularında uygun korunması, gerekse bu endotel hasarı veya Descemet kıvrım sayısı yüksek gibi küçük kusurları greft sıcaklık değişimlerinin ise korneanın hatası veya yanlış ele retina dokuların bütünlüğünü tehlikeye atabilir yol açabilir gibi kritik öneme sahiptir. Bu yazının amacı, kornea kalınlığı ve retina dokularında transplantasyon veya araştırma amaçlı kullanım tehlikeye hasar veya tadilat neden olmadan, en iyi şekilde izole edilebilir nasıl göstermektir. Gerekli minim.......

Malzemeler

Kornea ve retinanın eksizyonu için malzemeler.

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ürün tanımı	Boyutlar	Firma / Kurum
Güvenlikli neşter atılabilir	Blade boyutu 15	Swann-Morton
Steril bandajlar	5 cm X 5 cm, 8 katlı, 5 adet	Artsana
Steril tek kullanımlık tıbbi havlu	35 X 50 cm	U.Jet
Steril makas	Bıçakları 24 mm / toplam uzunluk. Künt, 95 mm kavisli	e.janach
Steril forseps	Paslanmaz çelik -100 mm 11 X 2 0.70 mm diş tarafından yönetildi	e.janach
Kornea pençe - Tek kullanımlık tıbbi cihaz		NIIOS (Hippocratech)
	Hazırlıklar
PBS	[10x] 900 ml d / w (saf su) 100 ml PBS	Sigma-Aldrich
Na-tiyosülfat	PBS [1x] 1 litre 1 gr Na-tiyosülfat	Sigma-Aldrich
I-PVP	1 litre d / w 5 gm I-PVP	Sigma-Aldrich

Tablo 2. Tablosu kornea ve retina çıkarılması ve bunların alınan şirket için kullanılan malzemeler açıklanmaktadır.

Depolama ortamı için malzeme (2000 mL).

Bileşenleri	Satıcı	Katalog numarası	Konsantrasyon	Miktar
MEM(1X) sıvı	Invitrogen	32360-034		1900 ml'lik
Sodyum piruvat	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml / l)	20 ml
L-glutamin	Invitrogen	25030-032	2mm (10ml / l)	20 ml
Antimikotik / Antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955-20ML	10 ml / l	20 ml
Yeni doğan buzağı serumu	Invitrogen	26010-74	2 (% 20 ml / l)	40 ml

Tablo 3. Depolama ortamı için malzemeler.

Depolama ortamı hazırlanması

Bir kavanozun içinde yukarıda verildiği gibi belirli konsantrasyonları kullanılarak tüm malzemeyi ekleyin ve iyice karıştırın. Onları filtrelemeperistaltik bir pompa yardımı ile 0.2 mikron filtre gözenek büyüklüğüne (Millipore, Milan, İtalya) kullanarak. Oda sıcaklığında şişe içinde orta muhafaza.

Taşıma ortamı için malzeme (2000 mL).

Bileşenleri	Satıcı	Katalog numarası	Konsantrasyon	Miktar
MEM (1X) sıvı	Invitrogen	32360-034		1800 ml'lik
Sodyum piruvat	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml / l)	20ml
L-glutamin	Invitrogen	25030-032	2mm (10 ml / l)	20ml
Yeni doğan buzağı serumu	Invitrogen	26010-74	2 (% 20 ml / l)	40 ml
Dekstran T500	Pharmacosmos	551005004007	% 6 (60 g / L)	120 g / l

Tablo 4. Taşıma ortamı için malzeme.

Taşıma ortamı hazırlanması

MEM ~ 1.5 litre Dekstran% 6 ekleyin ve gece boyunca bekletin. Medyada geri kalan malzemeleri ekleyin ve bir vakum pompası ile 0.2 mikron filtre (Millipore, Milan, İtalya) kullanarak filtre. Oda sıcaklığında şişe içinde orta muhafaza.