सहनशीलता प्रशिक्षण और ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के लिए प्रोटोकॉल अनुदैर्ध्य प्रदर्शन assays

Summary

हम एक महत्वपूर्ण आनुवंशिक मॉडल प्रजातियों के लिए पहली धीरज प्रशिक्षण प्रोटोकॉल का वर्णन,<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> और कई assays रूपरेखा गतिशीलता निम्नलिखित प्रशिक्षण में सुधार चार्ट.

Abstract

One of the most pressing problems facing modern medical researchers is the surging levels of obesity, with the consequent increase in associated disorders such as diabetes and cardiovascular disease ^1-3. An important topic of research into these associated health problems involves the role of endurance exercise as a beneficial intervention.

Exercise training is an inexpensive, non-invasive intervention with several beneficial results, including reduction in excess body fat ⁴, increased insulin sensitivity in skeletal muscle ⁵, increased anti-inflammatory and antioxidative responses ⁶, and improved contractile capacity in cardiomyocytes ⁷. Low intensity exercise is known to increase mitochondrial activity and biogenesis in humans ⁸ and mice, with the transcriptional coactivator PGC1-α as an important intermediate ^9,10.

Despite the importance of exercise as a tool for combating several important age-related diseases, extensive longitudinal genetic studies have been impeded by the lack of an endurance training protocol for a short-lived genetic model species. The variety of genetic tools available for use with Drosophila, together with its short lifespan and inexpensive maintenance, make it an appealing model for further study of these genetic mechanisms. With this in mind we have developed a novel apparatus, known as the Power Tower, for large scale exercise-training in Drosophila melanogaster ¹¹. The Power Tower utilizes the flies’ instinctive negative geotaxis behavior to repetitively induce rapid climbing. Each time the machine lifts, then drops, the platform of flies, the flies are induced to climb. Flies continue to respond as long as the machine is in operation or until they become too fatigued to respond. Thus, the researcher can use this machine to provide simultaneous training to large numbers of age-matched and genetically identical flies. Additionally, we describe associated assays useful to track longitudinal progress of fly cohorts during training.

Protocol

1. पावर टॉवर सेटअप और ऑपरेशन पावर टॉवर प्लाईवुड की एक आयताकार टुकड़ा है कि एक मेज पर clamped है पर रखा गया है. Grainger से 4.5 rpm के गियर मोटर चार 2 "x6" बोर्डों और एक ¾ इंच प्लाईवुड बोर्ड के शीर्ष पर टिकी हुई है. मोटर, एसी / डीसी एक गति नियंत्रण, एक फ्यूज, एक स्विच बंद / एक साथ एक समय बॉक्स में तार कर रहे हैं. मोटर शांत करने के लिए, एक छेद 3 इंच व्यास में प्लाईवुड का एक टुकड़ा खड़ी आधा इंच में कटौती है. एक तरफ, एक 3 इंच प्रशंसक प्लाईवुड के लिए जुड़ा हुआ है, और दूसरे पर, एक 3 इंच व्यास धातु सिलेंडर जुड़ा हुआ है. एक छोर पर घुड़सवार रोलर के साथ एक कस्टम घूर्णन हाथ मोटर से जुड़ा है. मोटर और संलग्न हाथ एक दक्षिणावर्त दिशा में घुमाने के लिए, नीचे तुला ¾ इंच वर्ग ट्यूब स्टॉक है कि एक दरवाजा काज के साथ प्लाईवुड के लिए जुड़ा हुआ है की एक तरफ धक्का. एक पहिया मंच के नीचे ट्यूब स्टॉक की ऊपर की ओर से जुड़ा हुआ है directl है कि मंच के खिलाफ रोल करने की अनुमतियह ऊपर वाई. हाथ ट्यूब स्टॉक के एक छोर पर नीचे धक्का और विपरीत अंत लिफ्टों, एक मंच के दो स्तर (चित्रा -1) बढ़ाने. जब हाथ पर रोलर ट्यूब स्टॉक साफ हाथ शुरू करने की स्थिति में लौटने के लिए, मंच वापस नीचे गिर (चित्र 1F) की अनुमति देता है. प्लेटफार्मों कि प्लाईवुड के शीर्ष पर रखा जाता है और बंजी तार कि पेंच आंखों पर झुका रहे हैं द्वारा सुरक्षित रैक से मिलकर बनता है. प्लेटफार्मों स्लाइड दराज स्लाइडर्स है कि कोष्ठक के साथ प्लाईवुड से जुड़े होते हैं साथ नीचे. शीशियों रैक में रखा जाता है और एक वर्ग ग्रिड स्क्रीन है कि बंजी तार के साथ जगह में आयोजित किया जाता है द्वारा सुरक्षित. स्टायरोफोम तकिया ड्रॉप के सदमे से गीला हो जाना करने के लिए मंच से नीचे रखा गया है. मोटर की शक्ति से निकाला जाता है कि इस तरह के एक पूर्ण घूर्णी अवधि 15 सेकंड लंबा है. 2. व्यायाम प्रोटोकॉल मक्खियों 50% आर्द्रता और 12 घंटे / प्रकाश अंधेरे चक्र के साथ एक 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखे जाते हैं. निर्माण – परिचालन – अंतरणघंटे व्यायाम प्रशिक्षण और व्यायाम क्षमता का मूल्यांकन एक 25 डिग्री सेल्सियस तापमान नियंत्रित कमरे में आयोजित कर रहे हैं. मक्खियों एकत्र कर रहे हैं और एक दूसरे के 1-2 दिनों के भीतर उम्र मिलान. 240 मक्खियों के एक न्यूनतम सहनशीलता और नकारात्मक (चढ़ाई) geotaxis के क्षमता, दो शारीरिक संकेतक है कि व्यायाम प्रशिक्षण के प्रभाव को प्रतिबिंबित के अनुदैर्ध्य निगरानी के लिए आवश्यक है. अनुदैर्ध्य निगरानी confounding प्रभाव के बिना साथियों के बीच भिन्नता से प्रेरित प्रत्येक काउहोट लिए शुरू मूल्यों के सापेक्ष परिवर्तन की अलगाव की अनुमति देता है. अतिरिक्त प्रयोगों के लिए मक्खियों की जरूरत के रूप में एकत्र किया जाना चाहिए. संग्रह के बाद, मक्खियों 120 प्रयोगात्मक मक्खियों, जो व्यायाम आहार, और 120 नियंत्रण मक्खियों, जो प्रयोग नहीं किया जाएगा के अधीन हो जाएगा में विभाजित कर रहे हैं. मक्खियों 20 की शीशियों में संग्रहित कर रहे हैं प्रत्येक मक्खियों. प्रयोगात्मक मक्खियों की शीशियों फर्म सेलूलोज़ एसीटेट Flugs के और नियंत्रण की शीशियों (unexercised) के साथ खामियों को दूर कर रहे हैं मक्खियों नरम स्पंज stoppers, w के साथ plugged रहे हैंhich नीचे धक्का दिया जा सकता है, जबकि पावर टॉवर पर मक्खियों को स्थिर करना. स्पंज स्थिरीकरण के लिए प्रयोग किया जाता है क्योंकि इसके अनुकूली आकार शीशी के नीचे के निकट आसान स्थान की अनुमति देता है. नरम स्पंज सामग्री चोटों अधिक ठोस Flugs द्वारा वजह भी कम कर देता है. पावर टॉवर पर मक्खियों को संग्रहित कर रहे हैं कि भोजन है, जो मक्खियों कि खाली शीशियों में प्रयोग कर रहे हैं की तुलना में एक नरम लैंडिंग के साथ उन्हें प्रदान करता है की 5 एमएल शामिल शीशियों में प्रयोग. खाना आमतौर पर 10% sucrose के, 10% खमीर, और पानी में 2% की अगर से बना है, हालांकि हम मक्खियों के लिए एक प्रशिक्षण सत्र के दौरान अक्सर खाने का पालन नहीं करते. यदि खाली शीशियों प्रशिक्षण के दौरान इस्तेमाल किया जाता है, मक्खियों कि चोटों पीड़ित के प्रतिशत में नाटकीय वृद्धि हुई है. पावर टॉवर एक कमरे के तापमान नियंत्रित है कि 25 में बनाए रखा है डिग्री सेल्सियस में संचालित है प्रयोगात्मक मक्खियों पावर टॉवर पर रखा जाता है और चढ़ाई करने के लिए बनाया है. नियंत्रण मक्खियों पावर टॉवर पर भी रखा जाता है, लेकिन स्पंज डाट नीचे ध् में धकेल दिया हैial मक्खियों से ऊपर के क्रम में आंदोलन की सीमा लगभग 3 मिमी. इस समूह में पावर टॉवर के किसी भी प्रभाव है कि व्यायाम करने के लिए असंबंधित हैं के लिए एक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है. हालांकि अभी भी कुछ कमरा इन मक्खियों के लिए पैंतरेबाज़ी करने के लिए मौजूद है, हम बार – बार देखा है कि इन परिस्थितियों में मक्खियों बहुत कम चलाने के लिए और एक शारीरिक व्यायाम करने के लिए प्रतिक्रिया का प्रदर्शन नहीं है. यह भी वांछनीय हो सकता है के लिए एक अतिरिक्त नियंत्रण समूह है कि पावर टॉवर पर सब पर नहीं रखा जाता है शामिल हो सकते हैं. मक्खियों लगातार पांच दिनों में प्रत्येक सप्ताह का प्रयोग कर रहे हैं, एक ramped अनुसूची (चित्रा 2) का उपयोग. एक सप्ताह के दौरान 2.5 घंटे के लिए प्रति सत्र 2 घंटे प्रति सत्र, दो सप्ताह के लिए मक्खियों का प्रयोग कर रहे हैं, और सप्ताह प्रति सत्र 3 घंटे के लिए तीन. हालांकि अन्य regimens परीक्षण किया गया है, इस प्रोटोकॉल जीनोटाइप भर और मुक़्तलिफ़ शर्तों के तहत अनुरूप परिणाम पैदा करता है. यह प्रोटोकॉल है, लेकिन, संभव रूपांतरों है कि एक विशेष रूप से प्रयोग के अनुरूप हो सकता है की एक विस्तृत सरणी के अधीन है. 3. व्यायाम और लोकोमोटर थकान धीरज अभ्यास के दौरान थकान के लिए एक उपयोगी शारीरिक पुष्टि करने के लिए और / या किसी दिए गए पलटन के व्यायाम क्षमता quantitate सूचक है. थकान assays साथियों कि प्रशिक्षण प्रयोगों में इस्तेमाल किया जाएगा पर longitudinally प्रदर्शन कर सकते हैं. Assays आयोजित किया जा सकता है या तो प्रशिक्षण प्रोटोकॉल, या दोनों के पूरा होने के बाद प्रशिक्षण से पहले,. अन्य मध्यवर्ती समय अंक अगर प्रशिक्षण के दौरान वृद्धिशील प्रगति अपनाने की इच्छा है जोड़ा जा सकता है. थकान परख भी आहार परिवर्तन (3B चित्रा) के रूप में इस तरह के प्रशिक्षण प्रोटोकॉल, की तुलना में अन्य उपचार करने के लिए एक प्रतिक्रिया के रूप में व्यायाम सहनशक्ति को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. थकान assays एक दिन पर आयोजित किया जाना चाहिए जब प्रशिक्षण के लिए जगह नहीं ले रहा है. दोनों प्रयोगात्मक और नियंत्रण मक्खियों पावर टॉवर पर प्रत्येक 20 की शीशियों में रखा जाता है और चढ़ाई करने के लिए जब तक थका हुआ. थकान व्यवहार चढ़ाई के साथ एक नकारात्मक geotaxis के प्रोत्साहन का जवाब विफलता के रूप में मान्यता प्राप्त है. थकान behavior दृश्य अवलोकन से रन बनाए है. मक्खियों की एक शीशी में माना जाता है थका हुआ जब 5 या कम मक्खियों लगातार चार बूंदों के लिए अधिक से अधिक 2 इंच चढ़ाई करने में सक्षम हैं. थका हुआ शीशियों पावर टॉवर से हटा दिया जाता है जबकि यह अभी भी काम कर रहा है, और हटाने का समय दर्ज की गई है. हटाने के समय, एक नेस्टेड हिस्टोग्राम के रूप में, या एक "समय के लिए विफलता" साजिश के रूप में साजिश रची जा सकता है. डेटा का एक उदाहरण योजना बनाई रूप में एक "समय के लिए विफलता साजिश चित्रा 3B में दिखाया गया है. शीशियों 10 घंटे की एक अधिकतम के लिए 10 मिनट के अंतराल (3B चित्रा) पर निगरानी कर रहे हैं. 4. व्यायाम, आयु, और लोकोमोटर योग्यता चूंकि यह प्रशिक्षण प्रोटोकॉल प्रेरित चल व्यवहार पर निर्भर करता है, प्रशिक्षण के प्रभाव quantitating के लिए एक प्राथमिक परख के longitudinally प्रशिक्षण के दौरान औसत गति चलाने में परिवर्तन को मापने के लिए है. प्रशिक्षण के दौरान प्रयोग और करमुक्त मक्खियों के 120 मक्खी साथियों दैनिक उनके एक नकारात्मक geotaxis प्रोत्साहन के लिए प्रतिक्रिया के लिए जांच की जाती है. रिंग तकनीक घGargano एट अल में escribed. (2005) 'मक्खियों चढ़ाई 12 क्षमता को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है. संक्षेप में, इस तकनीक के औसत नकारात्मक geotaxis के शामिल होने के बाद एक निर्धारित समय के दौरान मक्खियों की एक शीशी की ऊंचाई पर चढ़ गए उपाय. एक निर्धारित समय के दौरान ऊंचाई पर चढ़ गति चढ़ाई करने के लिए बराबर है. माप मशीन पर इतनी के रूप में दिन चलाने के बाद थकान से जटिलताओं से बचने के लिए दैनिक प्रशिक्षण के लिए मक्खियों रखने से पहले प्रदर्शन कर रहे हैं. हमारे मानक प्रोटोकॉल में तीन सप्ताह के कुल के लिए मक्खियों का प्रयोग कर रहे हैं और पांच सप्ताह की कुल के लिए चढ़ाई करने की क्षमता की जांच की है: तीन सप्ताह व्यायाम प्रशिक्षण और दो सप्ताह के दौरान व्यायाम की समाप्ति के बाद (चित्रा 2). यह प्रयोगकर्ता के चार्ट करने के लिए है कि गतिशीलता पर व्यायाम के प्रभाव कार्यक्रम की समाप्ति के बाद जारी रहती है की अनुमति देता है. प्रत्येक काउहोट दैनिक रिंग प्रदर्शन के चार तस्वीरें चढ़ाई करने की क्षमता का विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है. छह शीशियों प्रत्येक तस्वीर में शामिल हैं. नकारात्मक geotaxis प्रेरित है, और एक का उपयोगसमय कैमरा, एक तस्वीर सेकंड के एक निर्धारित संख्या के बाद लिया है. हम आम तौर पर दो सेकंड का उपयोग करें, हालांकि यह प्रयोगात्मक शर्तों के आधार पर अलग किया जा सकता है. हर तस्वीर के लिए, प्रत्येक शीशी बराबर की ऊंचाई चार quadrants में विभाजित है, और इमेज प्रोसेसिंग सॉफ्टवेयर के लिए एक मक्खी के आधार पर यह वृत्त का चतुर्थ भाग आवंटित समय अवधि के भीतर तक पहुँच स्कोर असाइन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. मक्खियों कि सर्वोच्च वृत्त का चतुर्थ भाग 4 के एक अंक प्राप्त करने के लिए, चढ़ाई उच्चतम अगले चक्र में मक्खियों एक 3 प्राप्त करने के लिए, दूसरा सर्वोच्च वृत्त का चतुर्थ भाग में मक्खियों एक 2 प्राप्त है, और सबसे कम वृत्त का चतुर्थ भाग में मक्खियों 1 प्राप्त करते हैं. मक्खियों है कि बंद के नीचे सब पर नहीं चढ़ाई 0 के एक अंक दिया जाता है. एक भी तस्वीर में शीशी में से प्रत्येक के लिए, एक "चढ़ाई" सूचकांक कि शीशी में सब मक्खियों का स्कोर औसत से उत्पन्न होता है. चार तस्वीरों से प्रत्येक शीशी सूचकांक तो उस दिन के लिए एक अंतिम चढ़ाई सूचकांक देने के लिए औसत रहे हैं. सभी यह नकारात्मक geotaxis प्रयोगों longitudinally आयोजित की जाती हैं. परिणाम सामान्यीकृत टीप्रारंभिक पूर्व व्यायाम स्कोर ओ के क्रम में करने के लिए क्षमता चढ़ाई में काउहोट भिन्नता के प्रभाव को कम करने और एक काउहोट व्यायाम प्रशिक्षण के परिणाम के रूप में चढ़ाई क्षमता में रिश्तेदार अनुदैर्ध्य परिवर्तन पर प्रकाश डाला. आरंभिक स्कोर पहले तीन दिनों चढ़ाई सूचकांक की औसत से निर्धारित होता है और 1 के एक मूल्य सौंपा है. बाद के परीक्षणों तो प्रारंभिक सूचकांक के एक प्रतिशत के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. 5. प्रतिनिधि परिणाम जंगली – प्रकार मक्खियों एक कम उम्र से संबंधित कमी के साथ क्षमता है कि प्रशिक्षण के अंत के बाद बनी रहती है, के रूप में उम्र के पांच सप्ताह (चित्रा 3A) के पार अनुदैर्ध्य रिंग assays में परिलक्षित चढ़ाई में एक धीरज प्रोटोकॉल का जवाब. यह नकारात्मक geotaxis में देरी गिरावट एक मानक प्ररूपी प्रतिक्रिया है कि एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में सेवा करने के लिए सुनिश्चित करें कि जंगली प्रकार के व्यायाम प्रतिक्रिया सामान्य रूप से होने वाली है. यह डेटा सेट का एक उदाहरण के रूप में प्रस्तुत किया है कि कैसे पावर टी द्वारा व्यायाम की प्रेरणower कार्यक्रम एक व्यवहार इनपुट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. विभिन्न आनुवंशिक या पर्यावरणीय कारकों इस आशय मिलाना की क्षमता फिर से मूल्यांकन किया जा सकता है. इसके विपरीत, पावर टॉवर भी विभिन्न प्रयोगात्मक डिजाइन में एक आउटपुट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, जीनोटाइप, आहार, या अन्य स्थितियों अलग किया जा सकता है. फिर, व्यायाम शरीर क्रिया विज्ञान पर इन बदलावों के प्रभाव पावर टॉवर का उपयोग कर परीक्षण किया जा सकता है. यहाँ, हम इस दृष्टिकोण का एक उदाहरण दिखाते हैं. जब अपने आहार में sucrose के एक अलग प्रतिशत के साथ मक्खियों थकान, वृद्धि sucrose वृद्धि सहनशक्ति क्षमता (3B चित्रा) के साथ सहसंबद्ध सामग्री के लिए समय के लिए परीक्षण किया गया. आकृति 1. पावर टॉवर के ऑपरेशन. (एसी) से मोटर संलग्न रोलर के साथ तुला हाथ तक यह तुला वर्ग ट्यूब के साथ संपर्क में आता है दक्षिणावर्त rotates के (डी, ई). हाथ तुला वर्ग ट्यूब पर नीचे धक्का मंच है कि मक्खियों की शीशियों के लिए लिफ्ट के साथ लादेन है हो सकता है. (एफ) हाथ के रूप में ट्यूब मंच वापस नीचे गिर अनुमति दी है, मक्खियों को शीशी के नीचे करने के लिए वापस जाने के लिए मजबूर साफ करता है. चित्रा 2. व्यायाम प्रोटोकॉल सुझाव. प्रशिक्षण प्रोटोकॉल के अधीन मक्खियों के लिए पांच दिनों के लिए प्रत्येक सप्ताह का प्रयोग एक तीन सप्ताह लंबी है ramped आहार कि उत्तरोत्तर प्रारंभिक से 2 घंटे 30 मिनट प्रत्येक सप्ताह से व्यायाम की अवधि बढ़ के तहत बना रहे हैं. मानक विश्लेषण से पहले थकान assays शामिल हैं और व्यायाम और 1 सप्ताह 5 सप्ताह के माध्यम से कार्यक्रम assays के रिंग के बाद. सभी assays दो प्रतियों में एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में, unexercised मक्खियों के बराबर संख्या पर प्रदर्शन कर रहे हैं. अन्य विभिन्न शारीरिक या जैव रासायनिक परीक्षण शोधकर्ता द्वारा निर्धारित रूप में आयोजित किया जा सकता है. / 3786fig3.jpg "> चित्रा 3. धीरज व्यायाम गतिशीलता के कई पहलुओं को बदल (ए) रिंग assays उम्र भर longitudinally पुरुष वाई 1 डब्ल्यू 67C23 साथियों की एक जोड़ी में प्रदर्शन किया. उम्र से मिलान, आनुवंशिक समान प्रयोग और करमुक्त नियंत्रण मक्खियों दैनिक औसत चढ़ाई की गति के लिए मापा गया. परिणाम है कि माप के पहले तीन दिनों के पार औसत ऊंचाई चढ़ाई करने के लिए सामान्य है एक चढ़ाई सूचकांक के संदर्भ में व्यक्त कर रहे हैं. व्यायाम प्रशिक्षित मक्खियों के एक कम उम्र से संबंधित में नकारात्मक geotaxis क्षमता (2 तरह से एनोवा, पी <.005) उम्र भर उम्र मिलान unexercised भाई बहन की तुलना में गिरावट प्रदर्शित. (बी) थकान assays पर 8 घंटे के लिए आयोजित की उम्र मिलान महिला एस गुआंगज़ौ मक्खियों थकान (लॉग – रैंक, पी 0.०,००१ <) करने के लिए समय पर आहार सूक्रोज सामग्री की एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखा. करने के लिए प्रयोग से पहले, मक्खियों एक खमीर / sucrose / अगर आहार खिलाया गया, 10% मात्रा / खमीर एकाग्रता वजन, और एक अलग प्रतिशत के साथ,आहार sucrose के. प्रत्येक 20 मक्खियों के पांच शीशियों प्रत्येक आहार के लिए परीक्षण किया गया. रुझान प्रदर्शित करता है कि कितने शीशियों अभी भी पांच या उससे अधिक एक निश्चित समय बिंदु पर चल रहा है मक्खियों. इन परिणामों के सांख्यिकीय और रेखांकन (या विफलता के लिए समय) एक समय में एक बिंदु है जब कम से पाँच मक्खियों नकारात्मक geotaxis उत्तेजना का जवाब के लिए जारी है के रूप में परिभाषित किया जा रहा शीशी के लिए 'नाकामी' के साथ जीवित रहने की अवस्था है, के रूप में इलाज किया जा सकता है. ध्यान दें कि कई अन्य संभावित अध्ययन डिजाइन और सांख्यिकीय उपचार संभव हो रहे हैं, और डेटा उपचार और माप के लिए व्यक्तिगत उद्देश्यों फिट अनुरूप होना चाहिए.

Discussion

सामान्य प्रोटोकॉल यहाँ प्रस्तुत है प्रशिक्षण के बाद मनोवैज्ञानिक प्रभाव का दस्तावेजीकरण में सफल रहा है. हालांकि, इस प्रोटोकॉल में कई क्षेत्रों में विशेष रूप से प्रयोगात्मक आवश्यकताओं फिट करने के लिए संशोधन के अधीन हैं. उदाहरण के लिए, और bouts के प्रशिक्षण संख्या की लंबाई संभावित कार्यक्रम को और अधिक या कम चुनौतीपूर्ण है, के रूप में वांछित विविध किया जा सकता है. कंटेनर है जो में नकारात्मक geotaxis के क्षमता मापा जाता है की ऊंचाई दस्तावेज सुधार के लिए उपलब्ध क्षेत्र में वृद्धि करने के लिए परिवर्तित किया जा सकता है. गति चढ़ाई की quantitation स्वचालित के विभिन्न तरीकों में भी लागू हो सकता है. सिद्धांत रूप में, किसी भी सॉफ्टवेयर पृष्ठभूमि से एक मक्खी भेद करने में सक्षम कार्यक्रम डेटा सभा की प्रक्रिया की गति इस्तेमाल किया जा सकता है.

प्रोटोकॉल के कुछ पहलुओं को बहुत सावधानी के साथ ही चाहिए लेकिन संशोधित. उदाहरण के लिए, प्रारंभिक प्रयोगों दृढ़ता से संकेत मिलता है कि प्रति सप्ताह बाकी के कम से कम एक दिन के लिए अधिक से अधिक इंप्रेशन की सुविधा देता हैसतत दैनिक व्यायाम से ovement. इसके अलावा, circadian लय और तापमान धीर जानवरों की आवाजाही को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है. दिन का समय है कि प्रशिक्षण जगह लेता है, अलग किया जा सकता है लेकिन हमेशा विशेष समूहों के भीतर लगातार तुलना के तहत हो, क्रम में circadian rhythms के confounding प्रभाव की संभावना से बचने के. तापमान नियंत्रण भी आवश्यक है, और हम घर व्यायाम उपकरण के लिए निरंतर तापमान पर एक समर्पित कमरे की सलाह देते हैं. अन्त में, पुरुषों और महिलाओं और उनका पालन किया जाना चाहिए मापा अलग क्रम में व्यायाम क्षमता में प्रजनन और यौन मतभेद के confounding प्रभाव की क्षमता से बचने के.

इस पद्धति के संभावित अनुप्रयोगों के शोधकर्ता की कल्पना केवल द्वारा सीमित हैं. प्रारंभिक काम में, हम तीन व्यापक अनुप्रयोगों में इस पद्धति का उपयोग किया है:

1. उम्र भर में जंगली प्रकार के जीव विज्ञान के विभिन्न पहलुओं पर धीरज व्यायाम के प्रभाव को मापने.
2. टीओ विशिष्ट उत्परिवर्ती phenotypes पर धीरज व्यायाम के प्रभाव को मापने के.
3. आनुवांशिक कारक है कि आवश्यक हैं के लिए स्क्रीन करने के लिए व्यायाम के लाभ पर अमल

इन आवेदनों में से प्रत्येक विशिष्ट संभावनाओं की एक विस्तृत विविधता शामिल हैं. हमारे प्रारंभिक अनुभव पर आधारित है, उत्परिवर्ती phenotypes में ज्यादा के रूप में व्यायाम के स्तर के साथ अलग अलग रूप में वे आहार के साथ बदलती हैं. में invertebrate मॉडल का उपयोग करने के लिए बेहतर आहार, व्यायाम, और उम्र बढ़ने के शरीर क्रिया विज्ञान के बीच संबंध को समझने के लिए शायद सबसे महत्वपूर्ण इस प्रोटोकॉल के सामान्य अनुप्रयोग है.

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Dayton Gearmotor	Grainger	1LRA6A
Raco Electrical Box	Grainger	5A052
Raco Cover	Grainger	5A053
Cooper Bussmann Fuse	Grainger	6F043
Cooper Bussmann Fuse Holder	Grainger	1DD33
Carling Technologies Switch	Grainger	2X464
Dayton Control, AC/DC Speed	Grainger	4X796
Flugs for Narrow Plastic Vials	Genesee Scientific	49-102