מחקר זה עוסק בפיתוח סטנדרטיזציה של פרוטוקול מתודולוגית חשוב לקבוע לטווח ארוך (14 יום) רעילות קטלני המופעל על ידי חומרים כימיים, שפכים תעשייתיים או ביוב דגימות סביבתיות נוזליים על לסרטן מים מלוחים, הארטמיה franciscana.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana
במאמר זה
סיכום
תקציר
פעילויות המחקר שלנו למקד את השימוש בשיטות ביולוגיות לצורך הערכה של איכות הסביבה, תוך התייחסות מיוחדת מים מלוחים / מים מליחים ומשקעים. הבחירה של אינדיקטורים ביולוגיים חייב להיות מבוסס על ידע מדעי אמין, אולי, על זמינותם של נהלים אחידים. במאמר זה, אנו מציגים פרוטוקול סטנדרטי המשמש לסרטן ימית הארטמיה להעריך את רעילות של כימיקלים ו / או של מטריצות הסביבה הימית. המדענים מציעים כי ארטמיה (הארטמיה) הוא המועמד המתאים לפיתוח המבדק תקן ניצול ברחבי העולם. מספר מאמרים פורסמו על ההשפעות הרעילות של כימיקלים שונים על toxicants ארטמיה (הארטמיה). היתרון הגדול של לסרטן זה ללימודים רעילות הוא הזמינות הכללית של ציסטות יבשים אלה יכולים לשמש מיד בבדיקת וטיפוח קשה לא דרש 3. השיטה המוצעת כרוך בתמותה כנקודת הסיום. המספרים של ניצולי נספרו ואחוז מקרי מוות חושבו. הזחלים נחשבו מתים אם הם לא מפגינים כל תנועה פנימית או חיצונית במהלך כמה שניות של התבוננות 4. הליך זה היה בדיקה סטנדרטית חומר ייחוס (Dodecyl נתרן גופרתי), כמה תוצאות מדווחים עבודה זו. מאמר זה מלווה בסרטון המתאר את ביצוע בדיקות רעילות פרוצדורלי, מראה את כל השלבים הקשורים בפרוטוקול.
פרוטוקול
1. שיטה סטנדרטית
בדיקה שלנו כרוך בחשיפת הזחלים הארטמיה למרווח של ריכוזי חומר או מדגם הבדיקה לצורך קביעת ריכוז או דילול לרמות שיגרמו למוות של 50% של האורגניזמים (LC 50) נחשף במהלך 14 יום ועמידה בתנאים המוגדרים בשיטה זו. אם יש צורך ואם ניתן לעשות זאת הבאה עשויה גם לקבוע: א) רמת הריכוז הגורם למוות של 20% של אורגניזמים שנחשפו (LC 20), ב) הריכוז הגבוה ביותר ברמה ניתחו כי אינו קובע שיעור תמותה גבוה יותר מזה של הביקורת השלילית (NOEC); הרמה הנמוכה ביותר ריכוז נבדק הקובע, לאחר 14 יום, שיעור תמותה גבוה יותר מזה של שליטה שלילי (LOEC).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הארטמיה הוא אחד היצורים הבדיקה הערך הרב ביותר עבור בדיקות ecotoxicity מחקר שנעשה עד כה מאפשר לנו לקבוע כי אפשר לקיים מספר אפשרויות הקשורות לשימוש הארטמיה ב טוקסיקולוגיה Ecotoxicology. המאפיינים שהופכים את האורגניזם למין מתאימים bioassays הם: פיזור גיאוגרפי רחב, הסתגלות גבוהה לתנאי סביבה קשים וחומרים מזינים שונים, תרבות מעבדה פשוטה יחסית ותחזוקה, עמידות מניפולציה, מחזור חיים קצר, ייצור צאצאים גדול ואת קיומה של כמות ניכרת של מידע על מינים מסוימים. הביקורת נגד השימו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגוד עניינים הצהיר.
תודות
הופק על ידי Loredana Manfra של מכון המחקר להגנה על הסביבה (Ispra-מחלקת ניטור איכות הסביבה) ו פדריקה Savorelli של הסוכנות האזורית לאיכות הסביבה (Emilia-Romagna, איטליה).
התייחסות חברי עבור קבוצת המשנה העבודה על הארטמיה לסרטן בקבוצת שיטות ביולוגיות - מים מלוחים / מים מליחים ומשקעים של ועדת UNICHIM על איכות המים (המכון הפעלה תקינה טכנית במגזר כימי).
Videography ועריכה על ידי מרקו Pisapia של Ispra (יחידת האינטרנט).
תיאו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
הופק על ידי Loredana Manfra של מכון המחקר להגנה על הסביבה (Ispra-מחלקת ניטור איכות הסביבה) ו פדריקה Savorelli של הסוכנות האזורית לאיכות הסביבה (Emilia-Romagna, איטליה).
התייחסות חברי עבור קבוצת המשנה העבודה על הארטמיה לסרטן בקבוצת שיטות ביולוגיות - מים מלוחים / מים מליחים ומשקעים של ועדת UNICHIM על איכות המים (המכון הפעלה תקינה טכנית במגזר כימי).
Videography ועריכה על ידי מרקו Pisapia של Ispra (המדעית המייעצת שירותי תיעוד).
תיאום הפקה של אנה מריה קיקרו אריקה Magaletti של Ispra (מחלקת ניטור איכות הסביבה).
אנו רוצים להודות הסוכנות האזורית לאיכות הסביבה של אמיליה, רומניה, סניף פרארה Biologקבוצת שיטות iCal - מים מלוחים / מים מליחים ומשקעים של ועדת UNICHIM על איכות המים על שיתוף הפעולה, Rossella Boscolo ו מאסימו Gabellini של Ispra (החוג למניעת הקלה של השפעות) על התמיכה הכספית, ובית הספר בלונדון של שפות ברומא על התמיכה הלשונית שלהם.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם מגיב | חברה | מספר מוצר | |
| Dodecyl סודיום סולפט | Sigma-Aldrich | L4390 |
נספח
התקשורת אצות צריך להיות מוכנים באמצעות ריאגנטים איכות אנליטיות.
ליטר של פתרון מזין מוכן ידי המסת 300 גר '3 Nano, 30 גר' גר 'קרן היסוד PO 4 ו -20 של 2 Cl 4 NH במים מזוקקים.
ארבעת הפתרונות הראשונים (A, B, C, D) של מינרלים מוכנים כדלקמן:
- ליטר של פתרון "" המכיל 30 גרם של ZnSO 4 H 2 O, 25 גרם של CuSO 4 5 H 2 O, 30 גרם של COSO 4 7 H 2 O ו - 20 גרם של MnSO 4 H 2 O במים מזוקקים;
- ליטר של פתרון "B" המכילה 50 גרם של FeCl 3 • 6 H 2 O במים מזוקקים;
- ליטר של פתרון "C", המכיל 25 גרם של Na 2 מו 4 • 2 H 2 O במים מזוקקים;
- ליטר של פתרון "D" המכיל 50 גרם די Na 2 EDTA • 2 H 2 O במים מזוקקים.
ליטר של הפתרון הסופי של מינרלים (פתרון "E") מתקבל על הוספת aliquots של הנ"ל פתרונות מים מזוקקים. לפי הסדר הבא של בנוסף מומלץ: 100 מ"ל של פתרון "D", 10 מ"ל של פתרון "C", 10 מ"ל של פתרון "B" ו - 10 מ"ל של פתרון "".
שלושה initiaאני פתרונות (F, G, H) של ויטמינים מוכנים כדלקמן:
- ליטר של פתרון "F" המכיל 100 מ"ג של ביוטין במים מזוקקים;
- ליטר של פתרון "G", המכיל 10 גרם של תיאמין במים מזוקקים;
- ליטר של פתרון "H" המכיל 100 מ"ג של cobalamin במים מזוקקים.
ליטר של הפתרון הסופי של ויטמינים (פתרון "אני") מתקבל על הוספת 10 מ"ל של שלושת הפתרונות הראשונים למים מזוקקים.
ליטר של מדיה אצות מכינים על ידי המסת 1 מ"ל של פתרון מזין, 1 מ"ל של תמיסת מינרלים האחרון (פתרון "E") ו - 1 מ"ל של תמיסת ויטמין האחרון (פתרון "אני") במי ים. האחרון זה ניתן לקבל גם באמצעות המסת חומרים כימיים המוכרים איכות אנליטיות או ניסוח זמינים מסחרית במים מזוקקים או דה מיונן. תערובות מלח ליצירת מים מלוחים אידיאלי זמינים באופן מסחרי, למשל, את תערובות האוקיינוס מיידיות. זה recommended באמצעות מי ים עם מליחות של 30 (± 2) PSU וטמפרטורה של 20 (± 1) ° C.
מקורות
- Togulga, M. The Short-Term Toxicity of Two Toxicants to Artemia Nauplii. Tr. J. of Zoology. 22, 259-266 (1998).
- Persoone, G., Wells, P. G. Artemia in aquatic toxicology: a review. Artemia Research and its Applications. Morphology, Genetics, Strain characterizat....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
