प्रतिदीप्ति प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण के साथ वास्तविक समय ligand-रिसेप्टर बातचीत की निगरानी
Summary
हम दिखाना है संयुग्मित बहुलक (पीडीए) polydiacetylene और fluorophore biomolecules के संवेदन के लिए पीडीए liposomes की सतह से जुड़ी के बीच देरी. पीडीए liposomes भी जांच के रूप में इस्तेमाल किया जा biomolecules के लिए उनके सतहों पर रिसेप्टर अणु निहित है. Ligand-रिसेप्टर बातचीत fluorophore और पीडीए जो संवेदन तंत्र के आधार के बीच दक्षता झल्लाहट में परिवर्तन करने के लिए नेतृत्व.
Abstract
झल्लाहट एक प्रक्रिया है जिसके तहत ऊर्जा गैर radiatively एक स्वीकर्ता जमीन राज्य अणु एक उत्साहित दाता अणु से लंबी दूरी द्विध्रुवीय द्विध्रुवीय 1 बातचीत के माध्यम से स्थानांतरित है. एक analyte 2,3,4,7 पीडीए जुड़ी रिसेप्टर्स के साथ सूचना का आदान प्रदान के बाद यूवी विज़ पीडीए इलेक्ट्रॉनिक अवशोषण स्पेक्ट्रम (1 चित्रा) में नीले रंग की पारी: संवेदन परख वर्तमान में, हम पीडीए का एक दिलचस्प संपत्ति का उपयोग. वर्णक्रमीय ओवरलैप पीडीए अवशोषण स्पेक्ट्रम में यह बदलाव (स्वीकर्ता) पीडीए और rhodamine (दाता) के बीच (जे) में परिवर्तन कि दक्षता झल्लाहट में परिवर्तन करने के लिए सुराग प्रदान करता है. इस प्रकार, (ligand) analyte और रिसेप्टर्स के बीच बातचीत दाता fluorophores और पीडीए के बीच झल्लाहट के माध्यम से पता चला रहे हैं. विशेष रूप से, हम एक मॉडल प्रोटीन अणु streptavidin के संवेदन दिखाते हैं. हम भी प्रदर्शित गोजातीय सीरम albumin (BSA) के साथ liposome सतह के सहसंयोजक बाध्यकारी तंत्र झल्लाहट. टी के बीच ये बातचीतवह bilayer liposomes और प्रोटीन अणुओं वास्तविक समय में महसूस किया जा सकता है. प्रस्तावित विधि छोटे रासायनिक और बड़े जैव रासायनिक अणुओं संवेदन के लिए एक सामान्य तरीका है. चूंकि प्रतिदीप्ति आंतरिक रूप से अधिक वर्णमिति की तुलना में अधिक संवेदनशील है, परख का पता लगाने सीमा उप nanomolar रेंज या कम 8 में हो सकता है. इसके अलावा, पीडीए झल्लाहट में एक सार्वभौमिक स्वीकर्ता के रूप में कार्य कर सकते हैं, जिसका अर्थ है कि कई सेंसर (स्वीकर्ता) पीडीए दाताओं और अलग पीडीए liposomes की सतह पर संलग्न रिसेप्टर्स functionalized साथ के साथ विकसित किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
हम liposome सतह पर प्रोटीन की lysine अवशेषों के चयनात्मक बंधन प्रदर्शन किया है एनएचएस amine प्रतिक्रिया का उपयोग. इस झल्लाहट आधारित पद्धति बायोटिन streptavidin बाध्यकारी और प्रोटीन (BSA) liposome सतह के लिए बाध्य की वास्तविक समय ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन, राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच), सामग्री प्रौद्योगिकी केंद्र (MTC) और SIUC पर ORDA के माध्यम से इस कार्य के लिए वित्तीय सहायता प्रदान की गई थी. हम एक अनुदान (चे 0,959,568) के लिए एक FE-SEM की खरीद के लिए NSF धन्यवाद. हम उपयोगी विचार – विमर्श के लिए प्रो मैथ्यू McCarroll धन्यवाद देना चाहूंगा. जूलिया रेयेस उसे छात्रवृत्ति और वित्तीय सहायता के लिए COLCIENCIAS कोलम्बियाई एजेंसी और Universidad Pedagogica y Tecnologica डी कोलंबिया का शुक्रिया अदा करना होगा.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 10,12-pentacosadiynoic acid (PCDA) | GFS chemicals | 3261 | Light sensitive |
| N-hydroxysuccinimide (NHS) | Acros organics | 157270250 | Moisture sensitive |
| 1-(3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) | Chem-impex International | 00050 | |
| 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC) | Avanti Polar lipids | 850345P | |
| Rhodamine-tagged Bovine Serum Albumin (BSA-Rh) | Sigma Aldrich | A4537 | |
| (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(biotinyl)(biotin-DOPE) | Avanti Polar lipids | 870282 |
References
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