Gör-det-själv Device för återhämtning av kryokonserverade prover Tappade misstag i Kryogena Lagringstankar
Summary
Här presenterar vi en låg kostnad, hållbar cryotolerant enhet för prov hämtning från Dewar tankar fyllda med flytande kväve. Den enkla konstruktionen och den modulära utformningen av anordningen gör processen av prov hämtning från kryogena tankar säkert och enkelt.
Abstract
Flytande kväve är färglös, luktlös, extremt kallt (-196 ° C) vätska hålls under tryck. Den används ofta som en kryogen vätska för långtidsförvaring av biologiska material såsom blod, celler och vävnader 1,2. Den kryogena natur flytande kväve, medan idealisk för förvaring av prover, kan orsaka en snabb frysning av levande vävnader vid kontakt – känd som "kryogen Bränn" 2, vilket kan leda till allvarlig köldskador hos personer engagerade i lagring och hämtning av prover från termosbehållare med låg vikt. Dessutom, såsom flytande kväve avdunstar det minskar syrekoncentrationen i luften och kan orsaka kvävning, speciellt i begränsade utrymmen 2.
I laboratorier, är biologiska prover ofta lagras i kryokärl eller cryoboxes staplade i rostfritt stål rack inom Dewar tankarna 1. Dessa lagerhyllor är försedda med en lång axel för att förhindra lådor från att glida ut ur racken och in i botten avTermosbehållare med låg vikt vid rutinmässig hantering. Alltför ofta, men lådor eller injektionsflaskor med dyrbara prover glider ut och sjunker till botten av vätskefyllda kväve tanken. I sådana fall kan prover tediously hämtas efter överföring av flytande kväve till en extra behållare eller kasta den. Lådorna och flaskor kan sedan vara relativt säkert återhämtat sig från tömmas Dewar. Men gör kryogen typ av flytande kväve och expansionstakt sjunkna farligt prov hämtning. Det är allmänt rekommenderas av Safety kontor som provet återtag aldrig utföras av en enda person. Ett annat alternativ är att använda kommersiellt tillgängliga häftiga grabbers eller tång att dra ut flaskorna 3. Men innebär begränsad sikt inom de mörka vätskefyllda termosbehållare med låg vikt en stor begränsning i användningen av dem.
I den här artikeln beskriver vi byggandet av en Cryotolerant DIY hämtning enhet, vilket gör prov hämtning från Dewar innehåller frysmedier både säkra ennd lätt.
Protocol
Discussion
En av de vanligaste metoderna för att hämta cryoboxes och kryobehållare från botten av Dewar-behållaren är för dekantering flytande kväve till en extra behållare och dra ut proverna kvar i kolven eller flyter i dekanterades flytande kväve. Detta är dock en riskabel tillämpning, som kan orsaka kryogena brännskador eller kvävning på grund av långvarig exponering för flytande kväve ångor 2. Andra vanliga sätt att hämtning av fallna kryokärl innebär användning av köldkärlet tänger …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DIY kryogen Borttagningsmedlet hade testats i samband med projekten "Modeling bakteriellt protein prenylering i eukaryota celler med hjälp av bioinformatik och molekylär metoder" sponsrad av Mary Louise Andrews Award for Cancer Research program, Virginia Academy of Science ", fysiologisk betydelse av RNA Redigera i plasma dendritiska celler "som sponsras av Thomas F. Jeffress och Kate Miller Jeffress Memorial samverkan och statligt avtal 16.740.11.0364 (Ministeriet för vetenskap och utbildning, Ryssland). Vi vill tacka Beth Eom för hjälp med RNA integriteten experimentet.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
