שימוש ביצים מ<em> Schistosoma mansoni</em> כמו<em> ב-vivo</em> דגם של דלקת ריאות הנגרמת helminth
Summary
Schistosoma ביצים mansoni הם לגירוי חזק מסוג T helper 2 (Th2) בתגובה החיסונית, מאפיין של דלקת טפיל, אסטמה ודלקת אלרגית. פרוטוקול זה מנצל ס mansoni ביצה הזרקת ליצור CD4 תגובה ציטוקינים Th2-Induced דלקת בריאה, המאופיינת היווצרות גרנולומה ריאות סביב הביצה, eosinophilia והפעלה מקרופאג חלופי.
Abstract
טפילים Schistosoma הם תולעים דם להדביק כ 200 מיליון אנשים ברחבי העולם 1. זיהום כרוני עם Schistosoma, פתולוגיה חמורה, לרבות סיסטיק הכבד splenomegaly, נגרמת על ידי התגובה החיסונית את הביצים טפיל ולא הטפיל עצמו 2. ביצי הטפיל לגרום תגובה Th2 מאופיינת בייצור IL-4, IL-5 ו-IL-13, הפעלה חלופית של מקרופאגים ועל גיוס של אאוזינופילים. כאן אנו מתארים זריקת ביצים Schistosoma mansoni כמודל לבחון טפיל ספציפיים תגובות ציטוקינים Th2 בריאה ובלוטות לימפה וניקוז, היווצרות של גרנולומות ריאתי המקיפים את הביצה, ודלקות בדרכי הנשימה.
בעקבות רגישות intraperitoneal ואתגר תוך ורידי, ש ' ביצים mansoni מועברים אל הריאות באמצעות עורקי הריאה שם הם כלואים בתוך parenchyma ריאותגרנולומות על ידי המורכבות של לימפוציטים, אאוזינופילים ומקרופגים מופעל לחילופין 3-6. קשורה להיווצרות דלקת, גרנולומה של broncho-מכתשיים מקומות, הרחבת קשרי הלימפה מסוג CD4 ו מרוקנים הפעלת תא T ניתן לצפות. כאן בפירוט את הפרוטוקול לבידוד Schistosoma ביצים mansoni מ כבדי נגועים (שונה מ 7), רגישות ומאתגרת עכברים, לשחזר את אברי (broncho-מכתשיים שטיפה (BAL), ריאות ובלוטות לימפה וניקוז) לניתוח. אנו גם נציג היסטולוגית ונתונים חיסוניות והצעות חיסוניות ניתוח נוסף.
באופן כללי, שיטה זו מספקת במודל vivo לחקור helminth המושרה תגובות חיסוניות בריאה, שהוא החלים רחב המחקר של מחלות דלקתיות, כולל דלקת Th2 helminth, מחלות fibrotic, דלקת אלרגית ואסטמה. היתרונות של מודל זה לחקר typה 2 דלקת ריאות כוללים שחזור של תגובה דלקתית חזקה Th2 בריאה ובלוטות לימפה וניקוז, להקל על הערכה של דלקת בבדיקה היסטולוגית של גרנולומות המקיפים את הביצה, והוא חסר יכולת אחסון לטווח ארוך של הטפיל ביצים.
Protocol
Discussion
כאן, מודל העסקת Schistosoma ביצים mansoni לגרום לדלקת ריאות מסוג 2 מתואר. התכונות האופייניות של הדגם הזה כוללות את התגובה החיסונית חזקה Th2, דלקת דרכי הנשימה היווצרות גרנולומה ריאתי. מאז פרמטרים אלה נשענים על תגובות מסוג CD4 סלולריים Th2 11, זהו מודל שימושי כדי לחקור …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה"ב (NIH) AI091759 ו קרוהן קוליטיס קרן של ויליאם של אמריקה ואת שלבי Modell משפחה פרס קרן מחקר (ל MN). Schistosome נגועים עכברים סופקו על ידי מרכז המשאבים NIAID Schistosome (חוזה NIAID N01 A130026).
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
- Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
- Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
- Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
- Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
- Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
- Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
- Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
- Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
- Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).
