Schistosoma mansoni ägg är potenta stimulatorer av T-hjälpar typ 2 (Th2) immunsvar som är karakteristisk för parasitinfektion, astma och allergisk inflammation. Detta protokoll använder S. mansoni ägg injektion för att generera en CD4 Th2-cytokin-inducerad inflammatorisk respons i lungorna, som kännetecknas av lungan granulombildning runt äggets, eosinofili och makrofag alternativ aktivering.
Schistosoma parasiter är blodmaskar som infekterar uppskattningsvis 200 miljoner människor världen över 1. Vid kronisk infektion av Schistosoma, den allvarliga sjukdomstillstånd, inklusive leverfibros och splenomegali, orsakas av immunsvaret mot parasiten ägg snarare än själva parasiten 2. Parasit ägg inducera en Th2-respons kännetecknas av produktion av IL-4, IL-5 och IL-13, den alternativa aktivering av makrofager och rekryteringen av eosinofiler. Här beskriver vi injektion av Schistosoma mansoni ägg som en modell för att undersöka parasit-specifika Th2 cytokin svar i lungan och dränerande lymfkörtlar, bildandet av pulmonella granulom som omger ägget och luftvägsinflammation.
Efter intraperitoneal sensibilisering och intravenös utmaning, S. mansoni ägg transporteras till lungorna via lungartärerna där de fångade i lungparenkymmed granulom består av lymfocyter, eosinofiler och alternativt aktiverade makrofager 3-6. Associerad med granulombildning, inflammation i bronko-alveolära utrymmena, T-cellaktivering expansion av de dränerande lymfkörtlarna och CD4 kan observeras. Här har vi detalj-protokollet för att isolera Schistosoma mansoni ägg från infekterade lever (modifierad från 7), sensibiliserande och utmanande möss och utvinna de organ (bronko-alveolära lavage (BAL), lung-och dränerande lymfkörtlar) för analys. Vi inkluderar även representativa histologisk och data immunologiska och förslag för ytterligare immunologisk analys.
Totalt sett ger denna metod en in vivo modell för att undersöka helmint immunologiskt svar i lungan, som är brett tillämpbar på studiet av Th2 inflammatoriska sjukdomar inklusive helmintinfektion fibrotiska sjukdomar, allergisk inflammation och astma. Fördelar med denna modell för att studera type 2 inflammation i lungan innefattar reproducerbarheten av en potent Th2 inflammatorisk respons i lungorna och dränerande lymfkörtlar, lättheten för bedömning av inflammation genom histologisk undersökning av de granulom omger ägget, och potentialen för långtidslagring av parasiten ägg.
Här är en modell som använder Schistosoma mansoni ägg för att framkalla typ 2 lunginflammation beskrivits. Kännetecknen för denna modell inkluderar potent Th2 immunsvar, luftvägsinflammation och pulmonell granulombildning. Eftersom dessa parametrar är beroende av CD4 Th2-cellsvar 11, är detta en användbar modell för att undersöka effekterna av protein-specifika eller härkomstspecifik deletioner på Th2-cellsvar. Här avläsning skulle omfatta kvantifiering av antigen-specifika Th2 cytok…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av National Institutes of Health (NIH) AI091759 och Crohns och kolit Foundation of America: s William och Shelby Modell Family Foundation Research Award (till MN). Schistosome-infekterade möss som tillhandahålls av NIAID Schistosome Resource Center (NIAID Kontrakt N01 A130026).
Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |