Выделение и первичной культуре клеток крысы Печеночная
Summary
Первичные гепатоциты стать ценным инструментом для оценки биохимических, молекулярных и метаболических функций в физиологически соответствующие экспериментальные системы. Мы описываем надежный протокол для крыс на месте перфузии печени, которая постоянно создает жизнеспособную гепатоцитов до to1.0 × 10<sup> 8</sup> Клеток на препарат с жизнеспособность клеток от 88 ~ 96%.
Abstract
Первичная культура гепатоцитов является ценным инструментом, который широко используется в области фундаментальных исследований функции печени, болезни, патофизиологии, фармакологии и других смежных областях. Метод, основанный на двухступенчатую коллагеназы перфузии выделения интактных гепатоцитов был впервые введен Берри и другу в 1969 году 1, и с тех пор претерпел множество изменений. Наиболее часто используемый метод был описан Seglenin 1976 2. По существу, являются гепатоциты отделена от наркоза крысы взрослого без рециркуляции коллагеназы перфузии через систему воротной вены. Изолированных клеток, затем фильтруют через поры 100 мкм сетчатый фильтр нейлон размер, и культивировали на пластинах. После 4-часовой культуры, среда заменена сыворотки, содержащие или бессывороточной среде, например, HepatoZYME-SFM, дополнительное время для культуры. Эти процедуры требуют хирургического и стерильной культуры шагов, которые могут быть лучше продемонстрировали видео, чем текст. Hпрежде чем мы документально подробные инструкции для этих процедур, как видео, так и письменных протоколов, которые позволяют последовательно в поколение жизнеспособных гепатоцитов в больших количествах.
Protocol
Discussion
Первичная культура гепатоцитов в пробирке модель широко используется для изучения различных аспектов печени физиологии и патологии. Например, основной культуры используется для оценки выражения и функции наркотиков метаболизм ферментов, в том числе цитохрома Р450, метаболизм ле?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить г-на Джоша Basford и доктора Сяо-Мин Ли технической помощи. Эта работа была частично поддержана грантами NIH (DK70992 и DK92779 ОД).
References
- Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 43, 506-520 (1969).
- Seglen, P. O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods Cell Biol. 13, 29-83 (1976).
- Saito, K., Kobayashi, K., Mizuno, Y., Fukuchi, Y., Furihata, T., Chiba, K., Schmidt, M., Schmitz, H. J., Baumgart, A., Guedon, D. Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) agonists induce constitutive androstane receptor (CAR) and cytochrome P450 2B in rat primary hepatocytes. Drug Metab. Pharmacokinet. 25, 108-111 (2010).
- Gomez-Lechon, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man. Curr. Drug Metab. 5, 443-462 (2004).
- Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies. Malar. J. 6, 169 (2007).
- Bu, S. Y., Mashek, D. G. Hepatic long-chain acyl-CoA synthetase 5 mediates fatty acid channeling between anabolic and catabolic pathways. J. Lipid Res. 51, 3270-3280 (2010).
- Aiken, J., Cima, L., Schloo, B., Mooney, D., Johnson, L., Langer, R., Vacanti, J. P. Studies in rat liver perfusion for optimal harvest of hepatocytes. J. Pediatr. Surg. 25, 140-144 (1990).
- Jauregui, H. O., McMillan, P. N., Hevey, K., Naik, S. A quantitative analysis of lectin binding to adult rat hepatocyte cell surfaces. In Vitro Cell. 24, 401-412 (1988).
- Klaunig, J. E., Goldblatt, P. J., Hinton, D. E., Lipsky, M. M., Trump, B. F. Mouse liver cell culture. II. Primary culture. In Vitro. 17, 926-934 (1981).
- Hay, R. J. Operator-induced contamination in cell culture systems. Dev. Biol. Stand. 75, 193-204 (1991).
