चूहे में वीडियो - oculography

Summary

इस वीडियो oculography एक बहुत मात्रात्मक नेत्र मोटर प्रदर्शन की जांच के लिए विधि के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मोटर सीखने की है. यहाँ, हम वर्णन कैसे चूहों में वीडियो oculography के को मापने के लिए. सामान्य पर इस तकनीक लागू करने, है pharmacologically इलाज या आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों मोटर व्यवहार के अंतर्निहित शरीर क्रिया विज्ञान का पता लगाने के लिए एक शक्तिशाली अनुसंधान उपकरण है.

Abstract

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals^1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for “full-field” image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).

Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system⁵. Second, the oculomotor system is relative simple⁶; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture (“single joint”) and the three pairs of extra-ocular muscles⁷. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis⁸. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes⁹.

Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels¹⁰. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice⁸.

Protocol

1. तैयारी निम्न प्रयोगों पशु प्रयोगों के लिए Duch नैतिक समिति के अनुसार आयोजित की गई. वीडियो oculography के लिए चूहों की तैयारी. क्रम में एक माउस की आँख आंदोलनों को मापने के लिए, माउस के सिर करने के लिए स्थिर किया जाना चाहिए. इसलिए, एक कुरसी निर्माण के माउस की खोपड़ी (चित्रा 1) पर किया जाता है. और एक गैस चेंबर में ऑक्सीजन, isoflurane की एक मिश्रण (Rhodia Organique ठीक लिमिटेड, फ्रांस isofluran 1-1.5%) द्वारा माउस चतनाशून्य करना. अत्यधिक गैस scavenged है. नाक शंकु के माध्यम से संज्ञाहरण बनाए रखें. एक पैर की अंगुली चुटकी के माध्यम से संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें. 37 ° C पर इस्तेमाल करते हैं और एक गुदा thermosensor के एक हीटिंग पैड (FHC, Bowdoinham, इ) के साथ शरीर का तापमान बनाए रखें. उन्हें एक आँख मरहम (duratears, Alcon, बेल्जियम) के साथ कवर द्वारा आंखों की रक्षा करें. पृष्ठीय कपाल फर दाढ़ी और साफ़ और betadin के रोटेशन के साथ शल्य चिकित्सा के क्षेत्र को साफई या chlorhexidine समाधान. मध्य लाइन चीरा बनाने के लिए खोपड़ी के पृष्ठीय कपाल सतह बेनकाब. सतह को साफ और शुष्क है. शीर्षस्थान से लैम्ब्डा खोपड़ी के पृष्ठीय कपाल सतह पर, फॉस्फोरिक एसिड (केर, सीए फॉस्फोरिक एसिड जेल etchant 37.5%) की एक बूंद लागू होते हैं. 15 सेकंड के बाद etchant निकालें और फिर कपाल सतह खारा और शुष्क साथ साफ. इस etched के कपाल सतह OptiBond प्रधानमंत्री (केर, सीए) की एक बूंद और यह 30 सेकंड के लिए हवा सूखा के शीर्ष पर लागू करें. प्रधानमंत्री OptiBond के शीर्ष पर OptiBond चिपकने वाला (केर, सीए) की एक बूंद प्लेस और 1 मिनट (Maxima 480 दृश्य प्रकाश इलाज इकाई, हेनरी Schein, संयुक्त राज्य अमेरिका) के लिए प्रकाश के साथ इलाज. करिश्मा समग्र (Heraeus Kulzer, जर्मनी) की एक पतली परत के साथ चिपकने वाला परत कवर. समग्र में दो जुड़ा हुआ पागल (3 मिमी व्यास) एम्बेड. प्रकाश के साथ समग्र बाद में इलाज. जब आवश्यक हो, समग्र की अतिरिक्त परतों को लागू करते हैं और उन्हें प्रकाश के साथ इलाज. विज्ञापनमंत्री पोस्ट ऑपरेटिव पीड़ानाश के लिए buprenorphine (0.015 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति). पशु वापस अपने पैरों पर लगभग 5 मिनट के भीतर होना चाहिए. माउस घर पिंजरे में कमरे के तापमान पर सर्जरी के बाद कम से कम 3 दिनों के लिए ठीक करने के लिए अनुमति देते हैं. चूहों के लिए वीडियो oculography सेटअप (चित्रा 2). Restrainer में माउस प्लेस और restrainer दो शिकंजा (चित्रा 1) द्वारा उसके सिर को ठीक. माउस के इस प्रक्रिया के लिए anesthetized होने की जरूरत नहीं है. निरोधक समय 1 घंटे / दिन से अधिक नहीं होनी चाहिए. एक XY मंच पर माउस restrainer के सिर और शरीर है, जो बारी में turntable (व्यास: 60 सेमी) पर घुड़सवार माउंट. XY मंच का उपयोग करना माउस सिर turntable के केंद्र से ऊपर रखा जा सकता है. रास्ते से हटना, पिच और रोल अक्षों पर माउस ले जाया जा सकता है. आँख aligning के iscan syste द्वारा उत्पन्न की आँख का दृश्य छवि का उपयोग करके माउस के सिर सही रास्ते से हटना, पिच और रोल कोण में रखा गया हैमी. वैकल्पिक रूप से, कुरसी निर्माण एक stereotactic 11 फ्रेम में माउस के सिर पर रखा जा सकता है. turntable एक एसी सहायक नियंत्रित (सुरीले ड्राइव एजी, नीदरलैंड्स) मोटर और turntable की स्थिति से जुड़ा हुआ है एक तनाव नापने का यंत्र (Bourns इंक., सीए) turntable अक्ष से जुड़ी द्वारा नजर रखी है. एक बेलनाकार आसपास स्क्रीन (व्यास: 63 सेमी, ऊंचाई 35 सेमी) एक यादृच्छिक बिंदीदार पैटर्न (प्रत्येक तत्व 2 °) के साथ turntable को शामिल किया गया है, इस ड्रम भी एक एसी मोटर सहायक नियंत्रित (सुरीले ड्राइव एजी, नीदरलैंड्स) के साथ सुसज्जित है . बेलनाकार स्क्रीन की स्थिति एक तनाव नापने का यंत्र (Bourns इंक., सीए) अपने अक्ष और स्क्रीन एक हलोजन प्रकाश (20 वाट) के द्वारा जलाया जा सकता है संलग्न करने के लिए द्वारा नजर रखी है. दोनों आसपास के स्क्रीन और turntable स्वतंत्र रूप से संचालित कर रहे हैं. turntable और आसपास के स्क्रीन के आंदोलन एक कंप्यूटर है कि एक मैं / हे इंटरफ़ेस (CED सीमित, कैम्ब्रिज, यूनाइटेड किंगडम) के लिए जुड़ा हुआ है के द्वारा नियंत्रित किया जाता है. टाble और आसपास के स्क्रीन की स्थिति संकेत (कट ऑफ आवृत्ति: 20 हर्ट्ज) फ़िल्टर्ड रहे हैं, मैं / हे अंतरफलक के द्वारा डिजीटल और इस कंप्यूटर पर संग्रहीत. माउस की आँख तीन अवरक्त emitters के द्वारा प्रकाशित है (600 मेगावाट, फैलाव कोण: 7 °, शिखर तरंगदैर्ध्य: 880 एनएम रुपये घटकों, नीदरलैंड). दो अवरक्त emitters के turntable के लिए तय कर रहे हैं और तीसरे emitter के कैमरे से जुड़ा हुआ है. यह तीसरा emitter संदर्भ कॉर्निया (सीआर) प्रतिबिंब है, जो अंशांकन प्रक्रिया के दौरान और आँख आंदोलन रिकॉर्डिंग के दौरान प्रयोग किया जाता है पैदा करता है. एक अवरक्त सीसीडी कैमरा एक ज़ूम लेंस (ज़ूम 6000, Navitar इंक., NY) के साथ सुसज्जित turntable करने के लिए जुड़ा हुआ है और turntable के केंद्र के में माउस सिर पर केंद्रित है. कैमरा और खुला किया जा सकता है turntable के अक्ष के के बारे yawed जा सकता अंशांकन प्रक्रिया के दौरान ठीक 20 डिग्री से अधिक है. वीडियो संकेत एक आँख ट्रैकिंग प्रणाली (ETL-200, iscan, Burlington, एमए) द्वारा संसाधित है. Iscan प्रणाली एक algo का उपयोग करता हैrithm छात्र और संदर्भ सीआर के केन्द्रों पर नज़र रखने के लिए. प्रणाली क्षैतिज और ऊर्ध्वाधर दिशा में 120 हर्ट्ज की एक नमूना दर पर छात्र और संदर्भ सीआर को ट्रैक कर सकते हैं. संदर्भ सीआर स्थिति, छात्र स्थिति और छात्र आकार संकेत मैं / हे अंतरफलक के द्वारा डिजीटल जाता है और मेज और आसपास के स्क्रीन की स्थिति संकेत के रूप में एक ही फ़ाइल में संग्रहित कर रहे हैं. वीडियो छात्र ट्रैकिंग प्रणाली एमएस के लगभग 27 से आँख आंदोलन संकेतों के एक देरी लाती है. 2. औजार और माप नेत्र आंदोलनों का उपयोग छात्र – ट्रैकिंग वीडियो आँख ट्रैकिंग प्रणाली एक translational गति के रूप में छात्र के आंदोलन कब्जा. ट्रैक किए गए छात्र के translational गति एक translational घूर्णी केंद्र की आँख और आँख (corneal वक्रता यानी केंद्र) की शारीरिक केंद्र, और एक घूर्णी नेत्रगोलक की कोणीय रोटेशन के कारण घटक के बीच axial अंतर के कारण घटक शामिल हैं. घटाना द्वाराछात्र आंदोलन / स्थिति से संदर्भ सीआर आईएनजी, अवांछित translational घटक संकेत से सफाया कर दिया है, एक translational प्रस्ताव है कि केवल नेत्रगोलक के रोटेशन के कारण में जिसके परिणामस्वरूप. हालांकि वे अक्सर बहुत छोटे हैं, इस घटाव भी सिर और कैमरे के बीच अनुवाद समाप्त. निम्नलिखित अंशांकन 8,12 विधि द्वारा अवशिष्ट अलग translational गति नेत्रगोलक की कोणीय रोटेशन में बदल जाती है. यह अंशांकन से पहले किसी भी आंख आंदोलन प्रयोग किया गया था. इस तरह कैमरा है कि छात्र की वीडियो छवि की निगरानी के बीच में स्थित है और संदर्भ सीआर का प्रतिनिधित्व अधिमानतः प्रत्यक्ष शिष्य ऊपर आँख की खड़ी midline पर स्थित है कि माउस सिर की स्थिति को समायोजित करें. कोणीय कैमरा घुमाव है, जो अक्ष / कैमरा मेज पर corneal वक्रता केंद्र रखकर पूरा किया जा सकता है की वजह से सीआर संदर्भ आंदोलनों की न्यूनतम <./ Li> 10 ° turntable के ऊर्ध्वाधर अक्ष के चारों ओर (यानी 20 डिग्री चोटी पीक करने के लिए) कैमरा + / कई बार घुमाएँ. ट्रैक (पी) छात्र और संदर्भ सीआर कैमरा रोटेशन के चरम स्थिति में दर्ज की स्थिति का प्रयोग छात्र के रोटेशन की त्रिज्या की गणना (आर.पी., आर.पी. = Δ / पाप (20 °), जहां सीआर Δ (= पी), चित्रा 3A देखें). तथ्य यह है कि आर.पी. मूल्य पुतली के आकार पर निर्भर करता है के कारण एक छात्र आकार सुधार के लिए 12 (3B चित्रा) लागू किया जाना चाहिए. दोहराना 2.2 विभिन्न रोशनी शर्तों के तहत कई बार कदम (यानी छात्र आकार जोड़ तोड़, चित्र 3C) के क्रम में छात्र आकार निर्धारित करने के लिए – आर.पी. संबंध और एक आर.पी. सुधार वक्र (चित्र 3 डी) लिखें. आर.पी. मूल्य भी ऊर्ध्वाधर आंख स्थिति पर निर्भर करता है. जब प्रयोग खड़ी आँख आंदोलनों का कारण होगा तो ऊर्ध्वाधर आंख पदों के लिए अंशांकन के सुधार उच्च recommendable है13. संदर्भ सीआर स्थिति, पी स्थिति और छात्र आकार को मापने के द्वारा नेत्र (ई) की कोणीय स्थिति निर्धारित करें. संदर्भ सीआर स्थिति एक translational मुक्त छात्र स्थिति पैदा छात्र स्थिति से घटाया जाता है. पुतली के आकार को मापने के द्वारा आर.पी. मूल्य आर.पी. सुधार वक्र से निकाला जा सकता है और ई की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके किया जा सकता है ई = arcsin (Δ1) / आर.पी.} (चित्र 4A, जहां Δ1 = (पी 2 पी 1) और 1 पी और पी 2 घटाव के संदर्भ सीआर द्वारा सही कर रहे हैं). Turntable और / या आसपास स्क्रीन घुमाव के एक बड़े प्रदर्शनों की सूची अब oculomotor प्रणाली को प्रोत्साहित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. क्रम में अंधेरे में वीडियो oculography प्रदर्शन करने के लिए, माउस आँख के एक छात्र फैलने की सीमा और इन परिस्थितियों में छात्र पर नज़र रखने की अनुमति miotic दवा के साथ pretreated किया जाना चाहिए. हमारे प्रयोगों में, हम pilocarpine (4%, प्रयोगशालाओं Chauvin, फ्रांस) में छात्र फैलने की सीमा का उपयोग करेंअंधेरे. 3. डेटा विश्लेषण आँख पदों पर, तालिका स्थिति और आसपास के स्क्रीन के पदों सभी कोणीय स्थिति में परिवर्तित कर रहे हैं (चित्रा और 2.4 में 4B सूत्र देखें). आँखों का संकेत उनके 27 एमएस प्रेरित देरी के लिए पुतली ट्रैकिंग प्रणाली का इमेजिंग प्रसंस्करण द्वारा सही कर रहे हैं. आँख तालिका, और आसपास के स्क्रीन के कोणीय स्थिति भेदभाव और बटरवर्थ कम पास फिल्टर का उपयोग कर 20 हर्ट्ज की आवृत्ति बंद कटौती के साथ फ़िल्टर्ड. Saccades आँख वेग 40 ° / s का पता लगाने सीमा का उपयोग कर संकेत से हटा रहे हैं. डेटा का पता लगाने के सीमा पार करने के बाद 20 एमएस के पहले और 80 से शुरू निकाल दिया जाता है. टेबल, स्क्रीन के आसपास और आंख वेग संकेत निशान (चित्र 4C) में प्रत्येक व्यक्ति चक्र औसत का उपयोग कर रहे हैं. औसत संकेत एक उचित समारोह के साथ लगे हैं. सामान्य में, एक sinusoidal वेग उत्तेजना का इस्तेमाल किया है और औसतचक्र साइनस या cosinus समारोह (चित्रा 4C) के साथ लगे हैं. फिर, लाभ आँख वेग के प्रोत्साहन वेग के अनुपात के रूप में गणना किया जा सकता है, जबकि चरण आँख वेग और प्रेरणा वेग के बीच अंतर (डिग्री में) के रूप में अभिकलन किया जा सकता है. 4. प्रतिनिधि परिणाम के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मोटर सीखने (VOR अनुकूलन के, OKR अनुकूलन) वीडियो oculography के oculomotor प्रदर्शन के विभिन्न रूपों (:; VOR नेत्रहीन बढ़ाया पलटा vestibulo नेत्र VVOR पलटा vestibulo – नेत्र OKR यानी optokinetic प्रतिवर्त) की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. OKR कम आवृत्ति गड़बड़ी दृश्य प्रतिक्रिया का उपयोग करने के लिए compensates. OKR अच्छी तरह से प्रबुद्ध आसपास स्क्रीन (1 मूवी) rotating द्वारा प्रेरित किया जा सकता है. 1.6 डिग्री के एक आयाम के साथ -1.0 0.2 हर्ट्ज की आवृत्ति रेंज पर आसपास के स्क्रीन घूर्णन से पता चलता है कि कैसे optokinetic प्रणाली कम आवृत्ति रेंज था में एक और अधिक कुशल प्रतिकरात्मक तंत्र हैn उच्च आवृत्ति रेंज में (चित्रा 5A). VOR उच्च आवृत्ति सिर vestibular अंगों से संकेतों का उपयोग आंदोलनों के लिए क्षतिपूर्ति. VOR अंधेरे (मूवी 2) पशु (यानी turntable) rotating द्वारा प्रेरित किया जा सकता है. 1.6 डिग्री के एक आयाम के साथ -1.0 0.2 हर्ट्ज की आवृत्ति रेंज पर turntable घूर्णन दर्शाता है कि कैसे vestibulo – नेत्र प्रणाली कम आवृत्ति रेंज में से भी अधिक उच्च आवृत्ति रेंज में compensating आँख आंदोलनों को पैदा करने में कुशल है (चित्रा 5A) . संगीत समारोह में optokinetic और vestibulo – नेत्र प्रणाली अधिनियम, छवियों सिर आंदोलनों की एक विस्तृत रेंज पर रेटिना पर स्थिर किया जा सकता है. 1.6 डिग्री के एक आयाम के साथ -1.0 0.2 हर्ट्ज की आवृत्ति रेंज पर turntable घूर्णन, जबकि आसपास के स्क्रीन अच्छी तरह से प्रबुद्ध है (3 मूवी) से पता चलता है कि किस तरह आंख "उच्च लाभ पूरे आवृत्ति रेंज पर compensating आंदोलनों (चित्रा 5A उत्पन्न ). इन सभी लाभ और पीएचase मानों चूहों के लिए विशिष्ट हैं, हालांकि 14 लिंग और 15,16,17 तनाव मतभेद सूचित किया गया. turntable और आसपास के स्क्रीन पर स्वतंत्र नियंत्रण हमें दृश्य और vestibular जानकारी के बीच एक बेमेल के साथ चूहों का सामना करने के लिए सक्षम बनाता है. बेमेल दृश्य और vestibular जानकारी की एक लंबी अवधि के और वर्दी प्रदर्शन के बाद, माउस की VOR बदल दृश्य इनपुट (4 मूवी VOR अनुकूलन) के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए बदल जाएगा. Turntable घूर्णन चरण के आसपास के स्क्रीन (1 हर्ट्ज, 1.6 °) के साथ (यानी 180 °) VOR लाभ (चित्रा 5 ब) बढ़ जाती है. VOR लाभ में अधिक से अधिक परिवर्तन, जब एक परीक्षण सीखने प्रतिमान का उपयोग कर, अक्सर 30 मिनट के बाद तक पहुँच जाता है. चित्रा 1 माउस restrainer सिर और शरीर के योजनाबद्ध ड्राइंग. माउस के शरीर का उपयोग कर रोका है35 मिमी की एक व्यास के साथ एक प्लास्टिक बेलनाकार ट्यूब. माउस के सिर लोहे की पट्टी के लिए दो screws के साथ माउस की पीठ को जोड़ने के द्वारा स्थिर है. लोहे की पट्टी 30 डिग्री का कोण बनाता क्रम में माउस के लिए ambulation दौरान सामान्य पिच में सिर की स्थिति है. * दो पागल युक्त कुरसी के शीर्ष दृश्य. चित्रा 2 माउस सेटअप वीडियो oculography के योजनाबद्ध ड्राइंग. चित्रा 3 वीडियो छात्र ट्रैकिंग प्रणाली की अंशांकन. Turntable के ऊर्ध्वाधर अक्ष के चारों ओर 10 ° (यानी 20 डिग्री पीक करने के लिए पीक)) एक कैमरा / द्वारा घुमाया कई बार है. ट्रैक (पी) छात्र और संदर्भ कॉर्निया (सीआर) प्रतिबिंब कैमरा रोटेशन के चरम स्थिति में दर्ज छात्र के रोटेशन की त्रिज्या की गणना करने के लिए उपयोग किया जाता है(आर.पी.). बी) के छात्र व्यास की त्रिज्या पुतली के आकार पर निर्भर करता है. सी) उदाहरण अंशांकन प्रक्रिया के दौरान छात्र स्थिति पर पुतली के आकार के प्रभाव दिखा (दोनों पिक्सेल (पिक्सेल में मापा)). डी) आर.पी. और शिष्य व्यास के बीच संबंध एक माउस में मापा जाता है. तेरह विभिन्न छात्र व्यास आसपास के प्रकाश की तीव्रता बदलकर पूरा किया गया. चित्रा 4 मापने और आंख छात्र – वीडियो ट्रैकिंग का उपयोग आंदोलनों का विश्लेषण. सीआर स्थिति के लिए सही), ए) कोणीय छात्र स्थिति शिष्य की त्रिज्या (आर.पी.) और छात्र की स्थिति (पी से गणना की है. बी) प्रतिपूरक आँख आंदोलन का उदाहरण vestibular प्रणाली और दृश्य (दृश्य बढ़ाया VOR) उत्तेजक द्वारा प्रेरित है. turntable 1.6 डिग्री के एक आयाम के साथ 0.6 हर्ट्ज पर घुमाया sinusoidally था, जबकि आसपास के स्क्रीन को अच्छी तरह से प्रबुद्ध था. सी) रिकॉर्डिंग के विश्लेषणबी में दिखाया गया है). ग्राफ (नीला) turntable और छात्र (लाल) के औसत वेग का पता लगाने से पता चलता है. इन औसत निशान एक sinusoidal समारोह (काला) के साथ लगे थे. 5 चित्रा प्रदर्शन और oculomotor एक C57BL6 माउस में मापा प्रणाली के सीखने. ए) नेत्र आंदोलनों घुमाव (optokinetic पलटा आसपास के स्क्रीन के द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं: OKR, शीर्ष पैनल) अंधेरे (vestibulo नेत्र पलटा माउस rotating द्वारा, VOR, मध्य पैनल) और प्रकाश में माउस घूर्णन (नेत्रहीन बढ़ाया vestibulo नेत्र पलटा: VVOR, नीचे के पैनल में 0.2 से लेकर 1.6 डिग्री के एक आयाम में 1.0 हर्ट्ज आवृत्तियों के साथ). प्रतिवर्त का लाभ आंख वेग की उत्तेजना वेग अनुपात (बाएं पैनल) और प्रतिवर्ती क्रिया के चरण के रूप में गणना किया गया था आँख वेग और प्रेरणा वेग (सही पैनल) के बीच अंतर चरण से गणना किया गया था. बी) मोटर सीखने के द्वारा पूरा किया गया adaptively VOR बढ़ती चरण प्रशिक्षण प्रतिमान की एक बाहर का उपयोग कर. माउस एक visuovestibular प्रशिक्षण प्रतिमान जिसमें माउस के रोटेशन (180 °) चालीस मिनट के लिए आसपास के स्क्रीन (दोनों 1.0 हर्ट्ज, 1.6 ° पर घूर्णन) के रोटेशन के साथ चरण से बाहर था के लिए विषय था. हर 10 मिनट VOR (1.0 हर्ट्ज, 1.6 °) परीक्षण किया गया था. इस माउस में चरण के प्रशिक्षण के बाहर VOR लाभ में वृद्धि हुई. मूवी एक प्रतिमान है कि चूहों में OKR की लाती दिखा एनिमेशन फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें . मूवी 2 प्रतिमान है कि चूहों में VOR लाती दिखा एनिमेशन फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें . फिल्म 3 प्रतिमान है कि चूहों में VVOR लाती दिखा एनिमेशन..com/files/ftp_upload/3971/3971movie3.mov "लक्ष्य =" _blank "फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें. मूवी 4. चरण प्रशिक्षण प्रतिमान है कि चूहों में VOR अनुकूलन (वृद्धि) लाती visuovestibular बाहर दिखा एनिमेशन फिल्म देखने के लिए यहाँ क्लिक करें .

Discussion

आदेश में चूहों में उच्च गुणवत्ता वाले वीडियो आँख आंदोलनों रिकॉर्डिंग प्राप्त करने के लिए कई आवश्यकताओं को आवश्यक हैं. अंशांकन प्रक्रिया उपर्युक्त मानकीकृत मामले में प्रदर्शन किया जाना चाहिए. उदाहरण के लिए बंद केंद्र अंशांकन, जब छात्र संदर्भ सीआर के साथ खड़ी midline पर अंशांकन प्रक्रिया के दौरान तैनात नहीं है, आरपी की एक मूल्यवान समझना और नेत्र आंदोलन के फलस्वरूप एक overestimation में परिणाम देगा. इसके अलावा, हम अंशांकन प्रक्रिया में ¹² छात्र आकार सुधार विधि को एकीकृत करने की सलाह देते हैं, क्योंकि परीक्षण है कि एक बहुत ही स्थिर छात्र आकार दिखाने बहुत दुर्लभ हैं. सुनवाई के दौरान भी एक छोटे stressor पहले से ही छात्र व्यास काफी बदल सकते हैं.

जब एक आँख आंदोलन प्रयोग डिजाइन, निम्नलिखित कारकों को ध्यान में रखा जाना या के लिए नियंत्रित क्योंकि वे आँख आंदोलन प्रतिक्रिया को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है की जरूरत है: उम्र ^{13,18, 14} लिंग और ^15,16 तनाव19,. इसके अलावा, प्रयोगात्मक पशु pigmented irises के बाद छात्र का पता लगाने और ट्रैकिंग असंभव है जब छात्र और परितारिका के बीच विपरीत बहुत कम माउस / BALB सी में है, की तरह होना चाहिए. अत्यंत नर्वस या उत्सुक जानवरों के लिए, पहले प्रयोग करने के लिए प्रशिक्षित किया जाएगा, प्रयोगात्मक सेट अप और स्र्द्ध हालत के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. कम या आँखों के अर्द्ध बंद बंद करने में प्रक्रिया का परिणाम यह पशु हैंडलिंग और प्रयोग के दौरान नेत्र तरल पदार्थ की पीढ़ी से बचाता है, और फलस्वरूप एक बेहतर छात्र ट्रैकिंग पूरा किया है.

अंत में, प्राप्त करने और डेटा का विश्लेषण पशु प्रति दो से तीन घंटे की आवश्यकता है. इसलिए, आँख आंदोलन रिकॉर्डिंग की संभावना एक विशिष्ट प्रक्रिया से चयनित चूहों के लिए आवेदन किया है और एक उच्च throughput स्क्रीनिंग परीक्षा के रूप में उपयुक्त नहीं है रहेगा.

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
Isofluran	Rhodia Organique Fine LTD
Heating pad	FHC	40-90-8
Duratears	Alcon
Phosphoric acid gel	Kerr	31297
Optibond prime	Kerr	35369
Optibond adhesive	Kerr	35369
Charisma composite	Heraeus Kulzer
Maxima 480 light curing unit	Henry Schein
AC servo-controlled motor	Harmonic drive AG
Cylindric screen
Halogen light (20 W)	RS components
Potentiometers(precision)	Bourns inc.	6574
Power 1401 (I/O interface)	CED limited
Computers	Dell
Infrared emmitters	RS components	195-451
ETL-200	ISCAN
Zoom lens (zoom 6000)	Navitar inc.
Pilocarpinenitrate (minims)	Laboratoire Chauvin