Summary

Detta november i JUPITER

Published: November 01, 2011
doi:

Summary

Abstract

Novembernumret av Journal of visualiseras experiment börjar med en serie beteende experiment för att mäta behärskning av förmågan hos primater. Utredare från universitetet i Fribourg visar fyra förstå och nå uppgifter, som alla följer vanliga steg för bekvämt besöksförbud djuret och korrekt positionering huvudet. Den Brinkman Styrelsen test används för att bedöma nå för statiska objekt, medan de roterande Brinkman styrelsen presenterar ett tillstånd där djur behovet av att föregripa objektets läge. Den Brinkman Box testet gör fingerfärdighet som skall utredas under förhållanden där apan har färre frihetsgrader för att utföra förstå uppgiften och kan inte använda synen för att vägleda rörelse. Medan Brinkman styrelsen och box tester enbart lita på analys av video som erhållits under experiment, för att generera data har lådan nå uppgiften apparater detektorer som övervakar grepp och krafter last samt låda position, vilket gör detta test approprIATE för att mäta styrka och behärskning förmåga. I kombination, dessa fyra tester ger en kraftfull metod för att bedöma motorisk kontroll i distala forelimb och Fribourg gruppen presenterar data från både lesion studier och experiment i syfte att testa potentialen behandlingsmetoder för ryggmärgsskada.

I klinisk och translationell medicin, medarbetare från avdelningen för Kirurgisk Forskning vid Universitetssjukhuset Zürich och Institutet för försöksdjursvetenskap vid universitetet i Zürich, arbeta tillsammans för att implantera en radiotelemetry enhet i möss, som kan användas för att ta fysiologiska mätningar i fritt rörliga djur. Enheterna består av två leder, som kan mäta biopotential aktivitet (EKG, EEG eller EMG) samt temperatur, och en lätt radiosändare (1-200 Hz bandbredd) som kan implanteras i bukhålan. Stressen av djurhantering samt anestesi är kända störande element som påverkar fysiologiskaal mätningar, så radiotelemetry enheter är ett bekvämt sätt att skaffa fysiologiska data från djur i en oberörd, naturliga tillstånd samt utföra mätningar av flera djur samtidigt.

JUPITER lägger också till sin mängd elektroporation protokoll med en metod för att införa macromoledules i kraniofaciala mesenkym att utveckla Xenopus laevis grodyngel, från Liu Lab vid Kings College London. Xenopus yngel överförs till en elektroporation kammare, där de kan injiceras med nukleinsyra, och sedan genomgå elektroporation, som kommer att leverera expressionsvektorer eller morpholinos i utvecklingsländerna kraniofaciala vävnad. Gene leverans till differentierade brosk är i sig problematiskt, och Liu lab visar att genom elecroporation kan morpholinos föras in procartilaginous och brosk vävnader i Xenopus grodyngel under en rad olika utvecklingsstadier.

I Bioteknik, de Zuckerman gruppen frånLawrence Berkeley National Laboratory illustrerar deras metod för syntes peptoids, en klass av biologiskt aktiva organiska molekyler som liknar peptider, men har sina sidokedjor bifogas kvävet i peptidbindningen, snarare än alfa-kol, vilket gör dem resistenta mot proteolys . Den Zuckerman Gruppen visar submonomer syntes, där peptid monomerer läggs sekventiellt i bromoacetylation och bromid reaktioner förskjutning, så peptoid kedjelängd och sammansättning att vara exakt kontrolleras. Dessutom är det faktum att syntesen görs på amid harts, och därmed fastfas syntes, förenklar rening av syntetiserade peptoids. Dessa författare visar också hur den nyligen syntetiserade peptoids kan förmås att själv montera in högt beställt strukturer, sk nanosheets, som kan visualiseras genom fluorescens och svepelektronmikroskop. Dessa nanosheets skulle kunna fungera som en möjlig plattform för protein och membran MIMETICS.

Senare i månaden, har JUPITER ett test för mätning av fagocyterande förmåga i celler som utsätts för kliniska antikroppar prover för våra Immunologi och Infektion avsnitt. Medarbetare från Massachusetts General Hospital och Dartmouth College visar att THP-1 celler kommer att uppsluka antikropp bundet antigencoatade pärlor i timelapse video mikroskopi och presentera en plåt-baserad metod flödescytometri för att kvantifiera omfattningen av fagocytos. Våra författare använder denna metod för att bestämma förmågan hos olika antikroppar prover för att framkalla fagocytos, exempelvis personer med hiv-patienter både behandlade och obehandlade med antiretrovirala behandlingar.

Denna sammanfattning av Jove innehåll i november ges en kort översikt av Jove höjdpunkter för månaden. Andra anmärkningsvärda artiklar innehåller metoder för live avbildning av cytoskelettala dynamik i endotelceller, som mäter kalcium flöde i cardiomyocytes, och skiva elektrofysiologi av vuxna födda nervceller i luktbulben.

Protocol

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes Urszula Golebiewska1, Suzanne Scarlata21Department of Biological Sciences and Geology, Queensborough Community College, 2Department of Physiology & Biophysics, Stony Brook University We present a method to isolate rapid (microsecond) calcium events from slower fluxes in living cells using laser scanning confocal microscopy. The method measures fluorescence intensity fluctuations of calcium indicators by recording line scans of several hundred pixels in a cell. Histogram analysis allows us to isolate the time scales of different calcium fluxes. Solid-phase Submonomer Synthesis of Peptoid Polymers and their Self-Assembly into Highly-Ordered Nanosheets Helen Tran, Sarah L. Gael, Michael D. Connolly, Ronald N. ZuckermannMolecular Foundry, Lawrence Berkeley National Laboratory A simple and general manual peptoid synthesis method involving basic equipment and commercially available reagents is outlined, enabling peptoids to be easily synthesized in most laboratories. The synthesis, purification and characterization of an amphiphilic peptoid 36mer is described, as well as its self-assembly into highly-ordered nanosheets. Behavioral Assessment of Manual Dexterity in Non-Human Primates Eric Schmidlin*, Mélanie Kaeser*, Anne- Dominique Gindrat, Julie Savidan, Pauline Chatagny, Simon Badoud, Adjia Hamadjida, Marie-Laure Beaud, Thierry Wannier, Abderraouf Belhaj-Saif, Eric M. RouillerDepartment of Medicine, University of Fribourg* These authors contributed equally As manual dexterity is a prerogative mainly of primates, behavioral tasks have been developed in macaque monkeys. Four reach and grasp prehension tasks, measuring hand manipulation ability and force, allow to establish functional recovery after a lesion of the central nervous system and to test the effect of a treatment. Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples Elizabeth G. McAndrew1, Anne-Sophie Dugast1, Anna F. Licht1, Justin R. Eusebio1, Galit Alter1, Margaret E. Ackerman21Massachusetts General Hospital, Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard, 2Thayer School of Engineering, Dartmouth College We present a high-throughput flow cytometric assay to determine the phagocytic activity of antigen-specific antibodies from clinical samples, utilizing fluorescent antigen-coated beads and a monocytic cell line expressing multiple Fc receptors-providing receptor usage and phagocytic activity determinations in a standardized and reproducible fashion for any antigen of interest. Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin Travis M. Doggett, Jerome W. BreslinDepartment of Physiology, Louisiana State University Health Sciences Center Microscopic imaging of live endothelial cells expressing GFP-actin allows characterization of dynamic changes in cytoskeletal structures. Unlike techniques that use fixed specimens, this method provides a detailed assessment of temporal changes in the actin cytoskeleton in the same cells before, during, and after various physical, pharmacological, or inflammatory stimuli. Implantation of Radiotelemetry Transmitters Yielding Data on ECG, Heart Rate, Core Body Temperature and Activity in Free-Moving Laboratory Mice Nikola Cesarovic1, Paulin Jirkof2, Andreas Rettich2, Margarete Arras11Division of Surgical Research, University Hospital Zurich, 2Institute of Laboratory Animal Science, University of Zurich A surgical technique for implantation of commercially available telemetry transmitters used for continuous measurement of biopotential (one-lead ECG), heart rate, core body temperature and locomotor activity in freely moving mice is shown. Recommendations and protocols for post-operative care and pain relief, improving recovery, wellbeing and survival rate are also presented. Electroporation of Craniofacial Mesenchyme Jacqueline M. Tabler, Karen J. LiuDepartment of Craniofacial Development, King's College London Craniofacial cartilages develop in close contact with other tissues and are difficult to manipulate in live animals. We are using electroporation to deliver molecular tools during growth of the craniofacial skeleton while bypassing early embryonic effects. This approach will allow us to efficiently test candidate molecules in vivo. Slice Electrophysiological Recording and Optogenetic Stimulation of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb Matthew Valley, Sebastian Wagner, Benjamin W. Gallarda, Pierre-Marie LledoLaboratory for Perception and Memory, Institut Pasteur and Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Adult-born neurons expressing ChR2 can be manipulated in slice electrophysiological preparations in order to examine their contribution towards the function of olfactory neural circuits.

Tags

Play Video

Cite This Article
Kolski-Andreaco, A. November 2011: This Month in JoVE. J. Vis. Exp. (57), e4025, doi:10.3791/4025 (2011).

View Video