Biz bir tarif<em> Ex vivo enfeksiyon</emInsan fallop tüpü hücreleri ile bakteriyel patojenler doğrudan etkileşim görselleştirme> modeli. Tüm organ doku modeli araştırmak için kuruldu<em> C. trachomatis</em"Hayat" gibi koşullar altında kadın fallop tüpüne> bağlı patoloji.
Chlamydia trachomatis ile genital sistem enfeksiyonları (C. trachomatis) tüm dünyada kadınlarda en sık görülen cinsel yolla bulaşan hastalık vardır. Patojenlerin Verimsiz klirensi veya kalıcılık üst genital sistem enfeksiyonları artan ve enfekte dokuların 1,2 kronik inflamatuar zarar gerekiyordu yol açabilir. Sonuç olarak, pelvik inflamatuar hastalık (PID), tubal oklüzyon ve infertilite gibi ciddi klinik sekeller 3,4 oluşabilir.
C ile araştırmaların çoğu trachomatis epitel hücre çizgilerinden (örneğin HEp-2 hücreleri ve HeLa-229) veya farelerde yapılmıştır. Bununla birlikte, hücre kültürü bazlı modelleri ile olduğu gibi, ne de ana doku fizyolojisini ya da C'nin patofizyolojisini yansıtır yok in vivo 5 trachomatis genital sistem enfeksiyonları. Başka sınırlamalar gerçeği ile verilir, merkez sinyal şelaleri (ör. IFN-γ mediatintrasellüler klamidyal büyümesini kontrol ed JAK / STAT sinyal yolağı) temelde farelerde ve insanlarda 6,7 arasında farklılık. Biz ve diğerleri, bu nedenle C arasında doğrudan etkileşimleri araştırmak için bütün bir organın fallop tüpü model oluşturdu trachomatis ve insan fallop tüpü hücrelerinin ex vivo 8,9.
Bu amaçla, histerektomi geçiren kadınlarda insan fallop tüpleri C ile toplanır ve enfekte edildi 24 saat sonrası enfeksiyon içinde trachomatis serovar D., örnek nerede Chlamydia trachomatis algılamak için taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve transmisyon elektron mikroskobu (TEM) kullanılarak epitel hasarı gibi aracılık analiz C. Fallop dokusunda trachomatis dahil oluşumu.
Enfekte dokuya patojen ile endüklenen zarar görselleştirme zahmetli ve farelerde deney prosedürleri genellikle sınırlı değildir. Biz C. analiz etmek, insan fallop tüpleri bir ex vivo enfeksiyon modelinde kurulan Üst kadın genital sistem enfeksiyonları trachomatis. Bu metodun kullanılması suretiyle, C. görsel mümkün olduğu trachomatis – bir gün sonrası enfeksiyon içinde insan fallop tüpü epitel hasarını. Hücresel şişme ve lizis C. gözlendi tipik morfolojik değişiklikler vardı trachomatis – enfekte fallop tüpleri ancak enfekte olmayan kontrol. TEM analizleri klamidyalar yeniden farklılaşmış temel organları değil, aynı zamanda kalıcılık gösterebilir genişlemiş retiküler organları ile küçük inklüzyonlar büyük inklüzyonları gösteren, enfekte dokuların içinde tipik bir hücre içi gelişim döngüsünü gerçekleştirirken ortaya koymuştur. Ancak tek başına morfolojik resmi repl arasında ayrım yeterli değilazalmış metabolizma ile karakterize edilir ve icating ve inatçı enfeksiyonlar, antibiyotik 10 dayanıklılığı artar.
Enfekte fallop tüpleri epitel tahribatı C. bozulması için iki nedeni trachomatis – hücre içi gelişim döngüsü ve enfeksiyöz elementer cisimlerin serbest bırakılması veya pro-inflamatuvar 8 sürümü tamamlanmasından sonra enfekte olmuş epitel hücreleri. Patojen bağlı doku hasarı ve C'ye karşı konak bağlı immün reaksiyonlar trachomatis epitel hücre fonksiyonu, fibroblast şekillenmesi ve in vivo 8,11 nihayet tubal kaybına yol açan başlıca faktörler olması gerekiyordu.
Bu model önemli kısıtlamaları biri başlangıç C. sekonder etkileri analizi engellemektedir inflamatuar hücrelerin yokluğudur Fallop tüpü epitel trachomatis enfeksiyonu. Bununla birlikte, modeli ap olduğufarklı çevresel koşullarda (örneğin oksijen içeriği) ve akut C. ilk ana-immün yanıtı araştırmak için propriate trachomatis enfeksiyonları 8,9. Daha planları C'ye karşı antibiyotik test için bir model oluşturmaktır Tüm insan fallop tüpleri ve 2-foton lazer tarama mikroskop ile tuba epiteli gözlenen farklı gelişim aşamalarında metabolik durumları karakterize etmek trachomatis.
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma "Interfaces inflamasyon" Mükemmeliyet DFG-Küme (RA-Eğer, RA-D) tarafından desteklenmiştir. Biz Kristin Wischnat mükemmel teknik destek için minnettarız.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain