بروتوكول لجمع البنكرياس الإنسان
Summary
هذا الفيديو يشرح كيفية إجراء تشريح لمعالجة البنكرياس الإنسان إلى صيغ تخزين متعددة. ويحتفظ التوجه التشريحية في جميع أنحاء المناطق البنكرياس للسماح للتعريف تكوين جزيرة الإقليمية وكثافة.
Abstract
وقد تم تطوير هذا التشريح وإجراء المعاينة للشبكة لالمتبرعين البنكرياس مع برنامج (nPOD) مرض السكري لتوحيد إعداد البنكرياس تعافى من المتبرعين جثي. يتم تقسيم البنكرياس إلى 3 مناطق رئيسية (رأس والجسم، والذيل)، يليه المقاطع العرضية المسلسل في جميع أنحاء الإنسي إلى محور الأفقي. ومفروم تستخدم المقاطع بالتناوب لالبارافين ثابتة وكتل الطازجة والمجمدة وعينات من بقايا لاستعدادات مبكرة عينة مجمدة، سواء مع أو بدون ريبونوكلياز مثبطات، لDNA، RNA، أو عزل بروتين. الهدف العام المتمثل في البنكرياس إجراء تشريح هو لأخذ عينات من بنكرياس كامل مع الحفاظ على اتجاه التشريحية.
وتفيد التقارير الغدد الصماء خلية التجانس من حيث التكوين جزيرة، والحجم، وأرقام عن الجزر الإنسان بالمقارنة مع الجزر القوارض 1. غالبية الجزر الإنسان من رأس البنكرياس، وتتكون الجسم والذيل مناطق containin على الأنسولينز β خلايا يليه انخفاض نسب الجلوكاجون α التي تحتوي على خلايا والسوماتوستاتين المحتوية على δ خلايا. ببتيد البنكرياس التي تحتوي على خلايا PP وخلايا إبسيلون جريلين المحتوية موجودة أيضا ولكن بأعداد صغيرة. في المقابل، فإن منطقة الكلابي يحتوي على الجزر التي تتألف أساسا من خلايا البنكرياس PP ببتيد التي تحتوي على 2. هذه الاختلافات جزيرة الإقليمية تنشأ عن الاختلافات التنموية. البنكرياس يطور من براعم البنكرياس بطني وظهري في المعى الأمامي، وبعد التناوب على المعدة والاثني عشر، ينتقل الفص بطني والصمامات مع 3 ظهري. الفص بطني تشكل الجزء الخلفي من الرأس بما في ذلك عملية الكلابي في حين أن الفص الظهرية يؤدي إلى بقية الأعضاء. وأفادت التقارير أيضا الإقليمية اختلاف البنكرياس مع منطقة الذيل وجود أعلى كثافة جزيرة بالمقارنة مع مناطق أخرى، وظهري المكونات المشتقة من الفص تمر ضمور انتقائي في مرض السكري نوع 1 <sيصل> 4،5.
في كثير من الأحيان يتم استرداد أجهزة إضافية والأنسجة من المتبرعين، وتشمل الغدد الليمفاوية البنكرياس والطحال والغدد الليمفاوية غير البنكرياس. يتم استرداد هذه العينات مع تنسيقات مماثلة بالنسبة للبنكرياس مع إضافة عزل الخلايا cryopreserved. عندما يتم تضمين مع الاثني عشر القريبة من البنكرياس، قد يتم جمعها الغشاء المخاطي الاثنى عشر للكتل البارافين والمجمدة والاستعدادات المبكرة المفروم المجمدة.
Protocol
Discussion
الهدف من هذا الإجراء هو لتحديد معالجة البنكرياس القياسية التي يمكن أن تكون منسقة عبر مواقع جمع متعددة، وبالتالي تسمح بإجراء مقارنات للنتائج التي تم الحصول عليها من قبل مجموعات مختلفة. وتستند هذه الطريقة على معايير وممارسات تشريح الأمراض الجراحية مع خطوات إضافية لش?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر عائلات المانحين والمنظمات الحصول على الأعضاء المشاركين في هذا البحث ومارتينو وماريا Kusmartseva ايرينا للحصول على مساعدة الخبراء التابعة لها. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة أبحاث السكري الأحداث (MC-T.، MA) لدعم الشبكة للمتبرعين بالأعضاء البنكرياس مع مرض السكري.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
