Коллекция протокол для поджелудочной железы человека
Summary
В этом видеоролике показано вскрытие процедуры для обработки поджелудочной железы человека в различных форматах хранения. Анатомические ориентация сохраняется в течение поджелудочной регионов позволяют определить состав региональных островок и плотности.
Abstract
Это рассечение и процедуры отбора образцов, был разработан для сети поджелудочной доноров органов с диабетом (nPOD) в рамках программы стандартизации подготовки поджелудочной железы оправился от трупных доноров органов. Поджелудочная железа состоит из 3 основных регионов (голова, тело, хвост), а затем серийных поперечных срезов всей медиальной к поперечной оси. Переменный разделы предназначены для фиксированного парафина и свежезамороженной блоков и остатков образцов фарш для оснастки замороженных препаратов образца, с или без РНКазы ингибиторов ДНК, РНК или белка изоляции. Основная цель процедуры вскрытия поджелудочной железы, чтобы попробовать все поджелудочной железы при сохранении анатомической ориентации.
Эндокринные клетки неоднородность с точки зрения островок состав, размер, и количество сообщается на человека островков по сравнению с грызунами островки 1. Большинство человеческих островков из поджелудочной железы головы, тела и хвоста регионов состоят из инсулина containinг β-клеток, затем нижние пропорции глюкагон содержащие α-клеток и соматостатин-содержащие δ-клетками. Панкреатический полипептид содержащих ПП клетки и грелина содержащих клетки эпсилон также присутствуют, но в небольших количествах. В отличие от крючковатыми область содержит островков, которые в основном состоят из панкреатический полипептид, содержащий клетки PP 2. Эти региональные различия островок возникают развития различий. Поджелудочная железа развивается из брюшной и спинной поджелудочной почки в кишки и после поворота желудка и двенадцатиперстной кишки, брюшной движется доли и сливается с спинной 3. Вентральной доли является задняя часть головы, включая крючковатыми процесса, а спинной доли приводит к остальной части органа. Региональные изменения поджелудочной железы также сообщил, с хвостом области, имеющие высшее островок плотность по сравнению с другими регионами и спинной доли производные компоненты проходят выборочный атрофии сахарным диабетом 1 типа <sдо> 4,5.
Дополнительная органов и тканей часто оправился от доноров органов и включать поджелудочной железы лимфатических узлов, селезенки и поджелудочной железы, не лимфатических узлов. Эти образцы будут восстановлены с подобными форматами, как и для поджелудочной железы с добавлением изоляции криоконсервированных клеток. При проксимальной части двенадцатиперстной кишки входит поджелудочной железы, слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки могут быть собраны для парафиновых и замороженных блоков и оснастки фарш замороженные препараты.
Protocol
Discussion
Целью этой процедуры является определение стандартной обработки поджелудочной железы, которые могут быть согласованы на нескольких сайтах сбор и таким образом позволяет сравнение результатов, полученных разными группами. Вскрытие метод основан на стандартной хирургической патолог…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы благодарят доноров, семей и органов заготовительных организаций, участвующих в этом исследовании и Мария Мартино и Ирина Kusmartseva за экспертную помощь. Эта работа финансировалась по делам несовершеннолетних исследований диабета Foundation (MC-T., MA) в поддержку сети поджелудочной доноров органов с диабетом.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
