Summary

بصري تسجيل النشاط العصبي للقرار suprathreshold وحيدة الخلية واحد مسمار-

Published: September 05, 2012
doi:

Summary

فهم وظيفة النظام العصبي المركزي الفقاريات يتطلب من الخلايا العصبية تسجيلات عديدة بسبب الوظيفة القشرية تنشأ على مستوى السكان من الخلايا العصبية. مخلوطة الوصول العشوائي المسح نحن هنا وصف أسلوب بصري لتسجيل النشاط العصبي للقرار suprathreshold وحيدة الخلية واحد مسمار،. هذه الطريقة السجلات الكالسيوم مضان إشارات جسدية من الخلايا العصبية تصل إلى 100 الزمنية للقرار عالية. خوارزمية الاحتمالات القصوى deconvolves النشاط العصبي الأساسي suprathreshold من الكالسيوم إشارات جسدية مضان. هذا الأسلوب يكشف موثوق المسامير مع كفاءة عالية والكشف عن انخفاض معدل من ايجابيات كاذبة، ويمكن استخدامها لدراسة السكان العصبية<em> في المختبر</em> و<em> في الجسم الحي</em>.

Abstract

وعادة ما تجرى إشارة المعلومات في النظام العصبي المركزي من الفقاريات السكان من الخلايا العصبية بدلا من الخلايا العصبية الفردية. كما نشر النشاط التشويك suprathreshold ينطوي السكان من الخلايا العصبية. الدراسات التجريبية معالجة ظيفة القشرية مباشرة تتطلب بالتالي من التسجيلات السكان من الخلايا العصبية مع ارتفاع القرار. نحن هنا وصف أسلوب البصرية وخوارزمية deconvolution لتسجيل النشاط العصبي من الخلايا العصبية تصل إلى 100 مع القرار وحيدة الخلية واحد مسمار. هذه الطريقة تعتمد على الكشف عن الزيادات العابرة في داخل الخلايا الجسدية تركيز الكالسيوم المرتبطة طفرات suprathreshold الكهربائية (إمكانات العمل) في الخلايا العصبية القشرية. ويتحقق القرار الزمنية عالية من التسجيلات البصرية بواسطة تقنية مسح سريع الوصول العشوائي باستخدام صوتية البصرية انحراف (AODs) 1. ثنائي الفوتون الإثارة من نتائج الكالسيوم الحساسة للصبغة في القرار المكانية العالية في الدماغ تيس مبهمةمقاضاة 2. ويتحقق إعمار المسامير من التسجيلات الكالسيوم مضان بطريقة الاحتمالات القصوى. في وقت واحد التسجيلات الكهربية والضوئية لدينا تشير إلى أن طريقة موثوق يكشف المسامير (> 97٪ ارتفاع الكشف الكفاءة)، لديها انخفاض معدل كاذبة إيجابية الكشف عن ارتفاع (<0.003 المسامير / ثانية)، وعالية الدقة الزمنية (حوالي 3 مللي) 3. ويمكن استخدام هذه الطريقة البصرية لكشف ارتفاع لتسجيل النشاط العصبي في المختبر وعلى الحيوانات تخدير في الجسم الحي 3،4.

Protocol

1. الإعداد البصرية (الشكل 1) لمدة الفوتون الإثارة يتم استخدام الأشعة تحت الحمراء نظام ليزر الفيمتو ثانية نابض مع البقول. مطلوب انتاج الليزر عالية الطاقة (في بعض الحالات> 2W في الطول الموجي نانومتر 890) لتعويض الخسائر الك?…

Discussion

مخلوطة الوصول العشوائي المسح يكشف بشكل غير مباشر نشاط suprathreshold ارتفاعه من الزيادات في الكالسيوم داخل الخلايا الجسدية المرتبطة بكل ارتفاع في somata الخلايا العصبية. تم الكشف عن الزيادات في الكالسيوم داخل الخلايا بواسطة الأصباغ الفلورية الكالسيوم. القيود المفروضة على ا?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نشكر الدكتور راندي تشيتوود لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة وايت هول P. ألفريد سلون منح المؤسسة لHJK.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
      Optical components are listed in order, starting from the laser
Titan:Sapphire Laser Coherent Inc. Chameleon Ultra 2 High power output recommended (>2W at 900 nm)
Achromatic lens f = 30 mm Thor labs AC254-030-B Anti-reflection (AR) coating for 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
lens f = 75 mm Thor labs LA1608-B AR 650-1050 nm
lens f = 175 mm Thor labs LA1229-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 300 mm Thor labs AC254-300-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
Achromatic lens f = 100 mm Thor labs AC254-100-B AR 650-1050 nm
Acousto-optical deflectors Intraaction Corp ATD 6510CD2  
Reflective diffraction grating Newport 53-011R 100 grooves/mm for AODs with 65 MHz bandwidth and scan angle of 45 mrad
21.6 mm Brewster prisms Lambda Research Optics Inc. IBP21.6SF10  
Colored Glass Schott BG-39  
Dichroic mirror Chroma Technology Corp Z532RDC  
Photomultiplier modules Hamamatsu H9305-03  
DAC-ADC board National Instruments PCI-6115  
Oregon Green 488 Bapta-1 AM Invitrogen O-6807  

References

  1. Iyer, V., Hoogland, T. M., Saggau, P. Fast functional imaging of single neurons using random-access multiphoton (RAMP) microscopy. J. Neurophysiol. 95, 535-545 (2006).
  2. Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73 (1990).
  3. Ranganathan, G. N., Koester, H. J. Optical recording of neuronal spiking activity from unbiased populations of neurons with high spike detection efficiency and high temporal precision. J. Neurophysiol. 104, 1812-1824 (2010).
  4. Grewe, B. F., Langer, D., Kasper, H., Kampa, B. M., Helmchen, F. High-speed in vivo calcium imaging reveals neuronal network activity with near-millisecond precision. Nat. Methods. 7, 399-405 (2010).
  5. Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 7319-7324 (2003).
  6. Pita-Almenar, J. D., Ranganathan, G. N., Koester, H. J. Impact of cortical plasticity on information signaled by populations of neurons in the cerebral cortex. J. Neurophysiol. 106, 1118-1124 (2011).
  7. Kerr, J. N., Greenberg, D., Helmchen, F. Imaging input and output of neocortical networks in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 14063-14068 (2005).
  8. Lin, B. J., Chen, T. W., Schild, D. Cell type-specific relationships between spiking and [Ca2+]i in neurons of the Xenopus tadpole olfactory bulb. J. Physiol. 582, 163-175 (2007).
  9. Zeng, S., Lv, X., Zhan, C., Chen, W. R. Simultaneous compensation for spatial and temporal dispersion of acousto-optical deflectors for two-dimensional scanning with a single prism. Opt. Lett. 31, 1091-1093 (2006).
  10. Otsu, Y., Bormuth, V., Wong, J., Mathieu, B. Optical monitoring of neuronal activity at high frame rate with a digital random-access multiphoton (RAMP) microscope. J. Neurosci. Methods. 173, 259-270 (2008).
  11. Vogelstein, J. T., Watson, B. O., Packer, A. M., Yuste, R. Spike inference from calcium imaging using sequential Monte Carlo methods. Biophys. J. 97, 636-655 (2009).
  12. Yaksi, E., Friedrich, R. W. Reconstruction of firing rate changes across neuronal populations by temporally deconvolved Ca2+ imaging. Nat. Methods. 3, 377-383 (2006).
  13. Hendel, T., Mank, M., Schnell, B., Griesbeck, O. Fluorescence changes of genetic calcium indicators and OGB-1 correlated with neural activity and calcium in vivo and in vitro. J. Neurosci. 28, 7399-7411 (2008).
  14. Ranganathan, G. N., Koester, H. J. Correlations decrease with propagation of spiking activity in the mouse barrel cortex. Front Neural Circuits. 5, 8 (2011).

Play Video

Cite This Article
Ranganathan, G. N., Koester, H. J. Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution. J. Vis. Exp. (67), e4052, doi:10.3791/4052 (2012).

View Video